ICS67.060 CCSX04 中华人民共和国国家标准 GB/T47209—2026 粮油检验 粮食中γ-氨基丁酸的测定 高效液相色谱法 Inspectionofgrainandoils—Determinationofγ-aminobutyricacidingrain— Highperformanceliquidchromatographymethod 2026-02-27发布 2026-09-01实施 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会发布前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由国家粮食和物资储备局提出。 本文件由全国粮油标准化技术委员会(SAC/TC270)归口。 本文件起草单位:国家粮食和物资储备局科学研究院、河南省食品和盐业检验技术研究院(河南省 粮油饲料产品质量监督检验中心)、上海科茂粮油食品质量检测有限公司、河北省粮油质量检测和信息 服务中心、山东省粮油检测中心、辽宁省粮食和物资储备事务服务中心、新疆维吾尔自治区粮油科学研 究所(新疆维吾尔自治区粮油产品质量监督检验站)。 本文件主要起草人:王丽、王佳雅、谢刚、陈园、李树朋、张艳、高敬铭、王媛媛、郁海菲、周明慧、王静、 杨琳琳、朱旭东、王依婷、王雪艳、闫露露、李文文、高海军。 ⅠGB/T47209—2026 粮油检验 粮食中γ-氨基丁酸的测定 高效液相色谱法 1 范围 本文件描述了测定粮食中γ-氨基丁酸的高效液相色谱法。 本文件适用于原粮及其碾磨制品糙米、大米、小麦粉、藜麦米、大豆中γ-氨基丁酸的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB/T5491 粮食、油料检验 扦样、分样法 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 原理 粮食中γ-氨基丁酸经乙醇水溶液提取,4-二甲基胺基偶氮苯-4-磺酰氯衍生,净化后用高效反相液 相色谱紫外检测器或二极管阵列检测器,在436nm波长下测定γ-氨基丁酸含量,外标法定量。 5 试剂和材料 除非另有说明,在分析中所用试剂均为分析纯试剂,水为符合GB/T6682规定的一级水。 5.1 试剂 5.1.1 无水乙醇(C2H5OH)。 5.1.2 乙腈(CH3CN):色谱纯。 5.1.3 碳酸氢钠(NaHCO3)。 5.1.4 冰醋酸(CH3COOH)。 5.1.5 三水合乙酸钠(CH3COONa·3H2O)。 5.1.6 4-二甲基胺基偶氮苯-4-磺酰氯(C14H14ClN3O2S):色谱纯。 5.2 材料 5.2.1 具盖离心管:2mL和50mL。 5.2.2 注射器:2mL。 1GB/T47209—2026 5.2.3 针式微孔滤膜:孔径0.22μm,水型。 5.2.4 滤膜:孔径0.45μm,水型。 5.3 试剂配制 5.3.1 乙醇-水溶液(4+1,体积比):量取800mL无水乙醇与200mL水混匀。 5.3.2 碳酸氢钠溶液(40mg/mL):称取0.40g碳酸氢钠,用水溶解并定容至10mL,现用现配。 5.3.3 4-二甲基胺基偶氮苯-4-磺酰氯衍生溶液(2mg/mL):称取20mg4-二甲基胺基偶氮苯-4-磺酰 氯,用10mL乙腈溶解,现用现配。 5.3.4 乙酸钠溶液(50.0mmol/L,pH5.5):称取6.80g三水合乙酸钠,用水溶解并定容至1L,用冰醋 酸调节溶液pH至5.5±0.1,经过0.45μm水型滤膜过滤后使用。 5.4 标准品 γ-氨基丁酸[γ-aminobutyricacid(GABA),C4H9NO2,CAS号:56-12-2]:纯度≥98.0%,或标准样 品/标准物质。 5.5 标准溶液配制 5.5.1 标准储备溶液(1000μg/mL):准确称取γ-氨基丁酸标准品10.0mg(精确到0.1mg),用乙醇-水 溶液(4+1,体积比)溶解转移至10mL容量瓶中定容至刻度。将溶液转移至棕色试剂瓶中,密封冷藏 于2℃~8℃冰箱内,有效期3个月。 5.5.2 标准使用溶液(50μg/mL):准确移取标准储备溶液2.5mL置于50mL容量瓶中,用乙醇-水溶 液(4+1,体积比)稀释并定容至刻度,混匀,现用现配。 5.5.3 标准系列工作溶液:准确移取标准使用溶液0.050mL、0.50mL、1.0mL、5.0mL、10.0mL、 20.0mL至50mL容量瓶中,用乙醇-水溶液(4+1,体积比)定容。得到标准曲线工作溶液质量浓度分 别为0.05μg/mL、0.5μg/mL、1μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL。 6 仪器和设备 6.1 高效液相色谱仪:配备紫外检测器或二极管阵列检测器。 6.2 分析天平:感量为0.01g、0.001g和0.0001g。 6.3 粉碎设备:能将样品粉碎至全部通过筛网孔径为0.25mm(60目)的筛。 6.4 标准筛:孔径为0.25mm(60目)。 6.5 pH计:精度±0.01。 6.6 涡旋混合器。 6.7 离心机:转速≥8000r/min。 6.8 恒温水浴锅:控温精度±1℃。 7 分析步骤 7.1 扦样与分样 按GB/T5491执行。 7.2 试样制备 样品经混匀后,缩分至不低于50g,粉状试样直接装入洁净容器中密封避光保存,备用;颗粒状样品 2GB/T47209—2026 置于粉碎设备(6.3)中粉碎,使其全部通过孔径0.25mm(60目)筛(6.4),混匀,装入洁净容器中密封避 光保存,备用。 7.3 试样处理 称取1g(准确至0.001g)样品于50mL具盖离心管中,加入20mL乙醇-水溶液(5.3.1),置于涡旋 混合器(6.6)涡旋振荡30min后,于转速为8000r/min的离心机(6.7)中离心10min,将上清液转入 50mL容量瓶中。样品残渣再加入20mL乙醇-水溶液(5.3.1),重复提取1次,将两次提取的上清液合 并,用乙醇-水溶液(5.3.1)定容至50mL,摇匀。 7.4 衍生化 吸取1.00mL待测溶液于2mL具盖离心管中,加入0.2mL碳酸氢钠溶液(5.3.2)和0.4mL4-二 甲基胺基偶氮苯-4-磺酰氯衍生溶液(5.3.3),混匀后在70℃水浴中衍生反应20min,冷却后通过 0.22μm水型针式微孔滤膜,滤液置于进样瓶中。 7.5 空白试验 吸取1.00mL乙醇-水溶液(5.3.1)于2mL具盖离心管中,后续操作同7.4。 7.6 仪器参考条件 7.6.1 色谱柱:C18柱(柱长250mm,柱内径4.6mm,柱填料粒径5μm),或性能相当者。 7.6.2 流动相:乙腈(5.1.2)-乙酸钠溶液(5.3.4)(35∶65,体积比),使用前脱气处理。 7.6.3 流速:1.0mL/min。 7.6.4 检测波长:436nm。 7.6.5 柱温:30℃。 7.6.6 进样体积:20μL。 7.7 测定 7.7.1 标准工作曲线的制作 吸取1.00mL标准系列工作溶液于2mL具盖离心管中,加入0.2mL碳酸氢钠溶液(5.3.2)和 0.4mL4-二甲基胺基偶氮-4-磺酰氯衍生溶液(5.3.3),混匀后在70℃水浴中衍生反应20min,冷却后 通过0.22μm水型针式微孔滤膜,滤液置于进样瓶中。 将衍生后的标准系列工作溶液按照从低浓度到高浓度的顺序依次进样,得到各浓度标准溶液衍生 物的色谱图。以γ-氨基丁酸的质量浓度(μg/mL)为横坐标、峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,标准溶液 衍生物色谱图见附录A。 7.7.2 样品测定 在与标准曲线测定相同的工作条件下,取待测样液注入高效液相色谱仪,以保留时间定性,测得峰 面积,根据标准曲线得到待测样液中γ-氨基丁酸的浓度。试样溶液中γ-氨基丁酸的浓度应在标准曲线 线性范围内,若超过线性范围,应将待衍生化的试样经乙醇-水溶液(5.3.1)稀释后,再经衍生化进行 分析。 3GB/T47209—2026 8 结果计算与表述 8.1 结果计算 试样中γ-氨基丁酸含量(X)以质量分数表示,按式(1)计算: X=(ρ-ρ0)×V×f×1000 m×1000……………………(1) 式中: X ———试样中γ-氨基丁酸含量,单位为毫克每千克(mg/kg); ρ———试样测定液中γ-氨基丁酸的质量浓度,单位为微克每毫升(μg/mL); ρ0———空白溶液中γ-氨基丁酸的质量浓度,单位为微克每毫升(μg/mL); V———试样制备时定容体积,单位为毫升(mL); f———稀释倍数; m———试样质量,单位为克(g)。 1000———单位换算系数。 8.2 结果表述 计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留三位有效数字。 9 精密度 在重复性条件下获得两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%,在再现性条件下 获得两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的15%。 10 其他 称样量1g,方法检出限为0.8mg/kg,定量限为2.5mg/kg。 4GB/T47209—2026