ICS11.220 CCSB41 中华人民共和国国家标准 GB/T47205—2026 血矛线虫病诊断技术 Diagnostictechniquesforhaemonchosis 2026-02-27发布 2026-09-01实施 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会发布目 次 前言 Ⅲ ………………………………………………………………………………………………………… 引言 Ⅳ ………………………………………………………………………………………………………… 1 范围 1 ……………………………………………………………………………………………………… 2 规范性引用文件 1 ………………………………………………………………………………………… 3 术语和定义 1 ……………………………………………………………………………………………… 4 缩略语 1 …………………………………………………………………………………………………… 5 临床诊断 1 ………………………………………………………………………………………………… 6 样品采集和处理 2 ………………………………………………………………………………………… 7 病原学诊断 3 ……………………………………………………………………………………………… 8 间接ELISA检测 4 ………………………………………………………………………………………… 9 PCR检测 5 ………………………………………………………………………………………………… 10 综合判定 7 ………………………………………………………………………………………………… 附录A(资料性) 血矛线虫病典型临床症状 8 …………………………………………………………… 附录B(规范性) 病原学诊断试剂配制方法 9 …………………………………………………………… 附录C(资料性) 血矛线虫病原形态特点 10 ……………………………………………………………… 附录D(资料性) 测微技术 12 ……………………………………………………………………………… 附录E(资料性) 重组HcADRM蛋白的制备和特性分析 14 …………………………………………… 附录F(规范性) 间接ELISA及PCR方法中试剂材料的制备 16 ……………………………………… 附录G(资料性) PCR检测引物序列及电泳图 18 ……………………………………………………… ⅠGB/T47205—2026 前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中华人民共和国农业农村部提出。 本文件由全国动物卫生标准化技术委员会(SAC/TC181)归口。 本文件起草单位:南京农业大学、江苏农林职业技术学院。 本文件主要起草人:严若峰、李祥瑞、徐立新、宋小凯、陆明敏、卜永谦。 ⅢGB/T47205—2026 引 言 血矛线虫病是牛羊等反刍动物常见的消化道寄生虫病,我国将其列为三类动物疫病。该病的病原 为圆线目(Strongylata)毛圆科(Trichostrongylidae)血矛属(Haemonchus)的捻转血矛线虫 (Haemonchuscontortus)、柏氏血矛线虫(H.placei)、似血矛线虫(H.similis)和长柄血矛线虫(H. longistipes),我国常见捻转血矛线虫感染。 血矛线虫的成虫寄生于反刍动物第四胃,吸食宿主血液。成虫产出虫卵随粪便排出,虫卵在外界适 宜条件下孵化出第一期幼虫,第一期幼虫经过两次蜕皮后发育为具有感染性的第三期幼虫,反刍动物食 入第三期幼虫而感染,随后在第四胃内进一步发育为第四期幼虫、第五期幼虫和成虫。羔羊等幼龄动物 感染导致贫血、腹泻、体重下降,甚至死亡;成年动物感染导致生长缓慢、饲料报酬降低。 ⅣGB/T47205—2026 血矛线虫病诊断技术 1 范围 本文件描述了血矛线虫病的临床诊断、病原学诊断、间接ELISA、PCR等诊断方法。 本文件适用于反刍动物血矛线虫病的诊断、检疫、监测和流行病学调查。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 NY/T541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 bp:碱基对(BasePair) BSA:牛血清白蛋白(BovineSerumAlbumins) DNA:脱氧核糖核酸(DeoxyribonucleicAcid) DMSO:二甲基亚砜(DimethylSulfoxide) EB:溴化乙锭(EthidiumBromide) ELISA:酶联免疫吸附试验(EnzymeLinkedImmunosorbentAssay) HcADRM:捻转血矛线虫黏附调节分子(HaemonchuscontortusAdhesionRegulatingMolecule) HRP:辣根过氧化物酶(HorseradishPeroxidase) PBS:磷酸盐缓冲溶液(PhosphateBufferedSaline) PCR:聚合酶链式反应(PolymeraseChainReaction) SPG:链球菌蛋白G(StreptococcalProteinG) TAE:三羟甲基氨基甲烷-乙酸-乙二胺四乙酸(Tris-Acetate-EDTA) TBST:三羟甲基氨基甲烷缓冲盐水-吐温-20溶液(TrisBufferedSaline-Tween-20) TMB:3,3,5,5'-四甲基联苯胺(3,3,5,5'-Tetramethylbenzidine) 5 临床诊断 5.1 流行特点 5.1.1 易感动物主要包括牛、羊、骆驼、鹿、羊驼等反刍动物。 1GB/T47205—2026 5.1.2 感染途径为经口感染,反刍动物因采食了含有第三期幼虫的牧草或饮水而感染。 5.1.3 有明显的季节性,北方春季高发,南方全年都可能发生。 5.2 临床症状 5.2.1 贫血,动物眼结膜苍白(见附录A中图A.1)。 5.2.2 水肿,动物下颌和下腹部水肿(见图A.2)。 5.2.3 腹泻,动物肛门和后肢常被粪便污染(见图A.3),幼龄动物严重感染可能引起死亡;如未死亡,则 转为慢性型,生长停滞,发育受阻,消瘦,被毛粗乱无光泽。 5.2.4 血常规检查异常,动物红细胞数量下降、血红蛋白含量降低。 5.3 病理变化 5.3.1 黏膜和皮肤苍白,血液稀薄,内脏器官苍白。 5.3.2 皮下水肿,皮下组织间隙内体液增多。 5.3.3 胸腔和心包积液,胸膜腔和心包腔内体液增多。 5.3.4 第四胃黏膜水肿,有不同程度的创伤及溃疡。 5.4 结果判定 反刍动物出现5.2中任何一项症状或存在5.3中任何一项病理变化,判断为疑似血矛线虫病例。否 则判断为非血矛线虫病例。 6 样品采集和处理 6.1 仪器设备 6.1.1 低温高速离心机、移液器、冰箱。 6.1.2 解剖刀、解剖剪、外科剪、平头镊子、托盘、瓷盆、塑料盆、平皿、烧杯、玻璃棒。 6.1.3 1.5mL离心管、无菌采血管、无菌采血针。 6.1.4 乳胶手套、一次性自封袋、记号笔。 6.2 试剂材料 生理盐水:按照附录B中B.1配制。 6.3 生物安全防护 进行动物剖检、样品采集和处理相关实验操作,按照NY/T541的规定执行。 6.4 粪便采集 直肠采粪,粪样分别放入一次性自封袋中,编号并填写采样单,4℃保存。 6.5 虫体采集 6.5.1 解剖动物取第四胃,将胃内容物倒入搪瓷盆(或塑料盆)中,胃黏膜用生理盐水充分清洗,冲洗物 和胃内容物混合。 6.5.2 向上述混合物中加入其体积5倍以上的生理盐水,用玻璃棒缓慢搅拌2min,静置20min后倾 去上清液,如此反复操作,直至上层液体透明为止。 6.5.3 弃去上层液体,保留沉淀物。分批取少量沉淀物置培养皿中,加等体积的生理盐水,放于白色和 2GB/T47205—2026