ICS11.220 CCSB41 中华人民共和国国家标准 GB/T47063—2026 马流感诊断技术 Diagnostictechniquesforequineinfluenza 2026-01-28发布 2026-08-01实施 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会发布目 次 前言 Ⅲ ………………………………………………………………………………………………………… 引言 Ⅳ ………………………………………………………………………………………………………… 1 范围 1 ……………………………………………………………………………………………………… 2 规范性引用文件 1 ………………………………………………………………………………………… 3 术语和定义 1 ……………………………………………………………………………………………… 4 缩略语 1 …………………………………………………………………………………………………… 5 生物安全措施 2 …………………………………………………………………………………………… 6 临床诊断 2 ………………………………………………………………………………………………… 7 样品采集、保存与运输 3 …………………………………………………………………………………… 8 病毒分离与鉴定 3 ………………………………………………………………………………………… 9 AC-ELISA 5 ……………………………………………………………………………………………… 10 RT-PCR 7 ………………………………………………………………………………………………… 11 实时荧光RT-PCR 8 …………………………………………………………………………………… 12 HI试验 10 ………………………………………………………………………………………………… 13 SRH试验 11 ……………………………………………………………………………………………… 14 综合判定 13 ……………………………………………………………………………………………… 附录A(规范性) 溶液的配制 14 …………………………………………………………………………… 附录B(资料性) EIV单克隆抗体包被板及酶标抗体的制备 15 ………………………………………… 附录C(资料性) 引物和探针 16 …………………………………………………………………………… 附录D(资料性) RT-PCR阳性对照质粒的制备 17 ……………………………………………………… 附录E(资料性) 实时荧光RT-PCR阳性对照质粒的制备 18 …………………………………………… 附录F(规范性) HI试验抗原和血清的处理 19 ………………………………………………………… 附录G(规范性) SRH试验相关溶液的配制 20 ………………………………………………………… ⅠGB/T47063—2026 前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中华人民共和国农业农村部提出。 本文件由全国动物卫生标准化技术委员会(SAC/TC181)归口。 本文件起草单位:中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、中国海关科学技术研究中心、北京市农林科 学院、中国兽医药品监察所。 本文件主要起草人:郭巍、胡哲、史喜菊、王晓钧、高志强、张伟、林健、毛娅卿、蒋桃珍、杨志远、王嘉、 段会娟、刘月焕、白子龙。 ⅢGB/T47063—2026 引 言 马流感(EquineInfluenza,EI)是由正黏病毒科A型流感病毒属马流感病毒(EquineInfluenza Virus,EIV)引起的具有高度传染性的马属动物急性呼吸系统疫病,我国《一、二、三类动物疫病病种名 录》收录马流感为三类动物疫病。EIV有两种不同亚型(H7N7和H3N8),自20世纪70年代末以来, 全球未分离到H7N7亚型EIV,我国亦只分离到H3N8亚型EIV。本文件对有临床症状的易感动物通 过病原检测方法或血清学检测方法进行实验室确诊。病原学检测采集鼻拭子,使用病毒分离、抗原捕获 ELISA、RT-PCR、实时荧光RT-PCR等方法进行检测。血清学检测采集配对血清,第一份血清应在临 床症状出现后马上采集,第二份血清在2周后采集,使用血凝抑制试验、单向辐射溶血试验等方法进行 检测,由于疫苗免疫动物在1个月内通常会出现抗体阳转或抗体效价显著升高,因此,出现EI临床症状 的动物如在1个月内接种过马流感疫苗,使用病原检测方法进行确诊。 ⅣGB/T47063—2026 马流感诊断技术 1 范围 本文件描述了马流感的临床诊断以及EIV分离鉴定、EIV抗原捕获ELISA、H3亚型EIVRT- PCR、H3N8亚型EIV实时荧光RT-PCR、血凝抑制试验、单向辐射溶血试验等实验室诊断方法。 本文件适用于马流感的诊断、检疫、监测和流行病学调查。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 NY/T541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 AC-ELISA:抗原捕获酶联免疫吸附试验(AntigenCaptureEnzymeLinkedImmunosorbentAssay) CPE:细胞病变(CytopathicEffects) Ct值:阈值循环数(Cyclethreshold) DEPC:焦碳酸二乙酯(DiethylPyrocarbonate) EI:马流感(EquineInfluenza) EIV:马流感病毒(EquineInfluenzaVirus) HA:血凝(Haemagglutination) HEPES:4-羟乙基哌嗪乙磺酸(2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonicaci) HI:血凝抑制(HaemagglutinationInhibition) HRP:辣根过氧化物酶(HorseradishPeroxidase) MDCK:犬肾(Madin-DarbyCanineKidney) OD:光密度值(OpticalDensity) PBS:磷酸盐缓冲液(PhosphateBufferedSaline) PBST:磷酸盐洗涤缓冲液(PhosphateBufferedSalineTween-20) RNA:核糖核酸(RibonucleicAcid) RT-PCR:反转录-聚合酶链式反应(ReverseTranscription-PolymeraseChainReaction) SPF:无特定病原体(SpecificPathogenFree) 1GB/T47063—2026 SRH:单向辐射溶血试验(SingleRadialHaemolysis) TMB:3',3',5',5'-四甲基联苯胺(3',3',5',5'-Tetramethylbenzidine) 5 生物安全措施 样品采集、保存、运输执行NY/T541的要求。本文件中各类试剂配制用水应符合GB/T6682的 要求。 6 临床诊断 6.1 流行病学 6.1.1 易感动物主要包括马、驴、骡、斑马,其中马最易感,临床症状最明显。 6.1.2 传染源主要为患病和带毒动物,病程初期患病动物排毒量最大。 6.1.3 传播途径主要通过气溶胶或飞沫,也经密切接触、交配、污染的饲料、器械或水源等传播。 6.1.4 EI在一年四季均有发生,北方地区以春秋多发。传播极为迅速,常呈暴发性流行,经1周或稍多 些时间,所有易感动物都感染发病。 6.2 临床症状 6.2.1 轻症型 此种病型常见,主要表现为轻度咳嗽,流水样或浆液性鼻汁,体温稍升高或正常,眼结膜潮红,一般 约1周后康复。 6.2.2 重症型 患畜突然发病,表现精神萎顿、食欲减退、肌肉疼痛、不愿活动。体温升高至39℃以上,稽留3d~4d, 发热的同时出现阵发性咳嗽,初为干咳,后可能转为湿咳,有冷空气或尘埃刺激时会出现剧烈咳嗽。初 期流浆液性或黏液性鼻汁,后期为黄白色脓性鼻汁。鼻黏膜潮红,眼结膜充血肿胀,流泪,分泌物增多。 呼吸加快,有的出现心律不齐,四肢下端或腹下发生浮肿。 6.3 病理变化 6.3.1 病理解剖变化 眼观病变为结膜潮红、水肿、外翻,呈砖红色或淡黄色,常出现角膜浑浊。上呼吸道黏膜充血、水肿 和渗出,上皮细胞脱落与局灶性糜烂。头、颈部淋巴结肿大。肺脏充血、水肿,扩张不全。肝脏一般无明 显眼观病变。 6.3.2 病理组织学变化 表现为急性支气管炎与细支气管炎,以管腔内有多量嗜中性粒细胞渗出为主要特征。炎症一过性, 一般只见于发病后的头4d,其后炎症消退,黏膜内遗留有轻度淋巴细胞,浆细胞浸润。严重病例为急性 支气管间质性肺炎,表现为肺泡纵膈普遍增厚,增生的细胞为组织细胞与淋巴细胞。肝脏可见肝窦状隙 内有弥散性或结节性淋巴细胞、组织细胞浸润。 6.4 结果判定 符合6.1,且出现6.2和6.3中的一条或多条情况,初步判为EI临床可疑病例。确诊需采集鼻拭子 2GB/T47063—2026