SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T2572-2010 进出口蜂王浆中多种氢基甲酸酯类 农药残留量检测方法 液相色谱一质谱/质谱法 Determination of multiple carbamate pesticide residues in royal-jclly for import and export--- HPLC-MS/MS 2010-12-01实施 2010-05-27发布 中华人民和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 数码防伪 SN/T 2572-2010 前 本标准按照GB/T1.12009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并口。 本标准起草单位：中华人民共和国浙江出人境检验检疫局。 本标准主要起草人：丁慧瑛、谢文、陈笑梅、蒋晓英、周召干。 - SN/T2572-2010 进出口蜂王浆中多种氨基甲酸酯类 农药残留量检测方法 液相色谱~质谱/质谱法 范围 本标准规定了蜂王浆中甲硫威、恶虫威、异丙威、甲威、灭多威、克百威、抗蚜威、仲丁威残留量的 液相色谱-质谱/质谱测定方法。 本标准适用于蜂王浆中甲硫威、恶虫威、异丙威、甲萘威、灭多威、克百威、抗蚜威、仲丁威残留量的 测定和确证。 2 方法提要 试样用乙睛提取，经中性氧化铝柱层析净化，液相色谱-质谱/质谱测定，外标法定量。 试剂和材料 除另有规定外，试剂均为分析纯，水为重蒸水或去离子水。 3. 1 甲醇：色谱纯。 3. 2 乙睛：色谱纯。 3.3 丙酮：色谱纯。 3.4 乙醚：色谱纯。 3.5 乙酸铵：色谱纯。 3. 6 氯化钠。 3. 7 0.005mol/L乙酸铵溶液：称取0.19g乙酸铵漆于适量水中，再定容到500mL。 3.8 甲醇-乙酸铵溶液：甲醇-0.005mol/L乙酸俊溶液（6十4，体积比）。 3. 9 丙酮-乙醚混合溶剂：丙酮乙醚（2十8，体积比）。 3. 10 氨基甲酸酯类标准品：甲硫威、恶虫威、异丙威、甲萘威、克百威、抗蚜威、仲丁威纯度均大于等于 99.0%。灭多威为98.8%，参见附录八。 3.11 氨基甲酸酯标准储备液：精确称取适量氢基甲酸酯标准品，用甲醇溶解，分别配制成浓度为 200μg/mL的标准储备液，4℃冰箱储存。 3.12氨基甲酸酯混合工作溶液：根据需要，分别取适量储备液于同一容量瓶中，用甲醇-乙酸铵溶液 （3.8)稀释至适当浓度的工作溶液。 3.13氨基甲酸酯校正溶液配制：将标准混合溶液用按6.1和6.2处理的空白样品溶液稀释成浓度为 5.0、10.0、20.0、50.0、100.0μg/L。 3.14中性氧化铝固相萃取小柱（500mg，3ml.）：使用前用5ml乙醚淋洗。 4 仪器和设备 4.1 液相色谱-串联质谱联用仪：配有电喷雾离子源和四极杆质量分析器。 1 SN/T 2572-2010 4.2 旋涡混匀器。 4.3 旋转蒸发器。 4.4 离心机：转速大于5000r/min。 4.5 真空固相萃取装置。 4.6 具盖塑料离心管：50mL。 试样制备与保存 5 取代表性样品约500g，将其用力搅拌均匀装入洁净容器内密封，并标明标记。于一18℃以下 保存。 在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。 6 测定步骤 6.1提取 称取2g试样（精确到0.01g）置于50mL离心管中，加10mL水涡旋混匀1min，静置5min。加 入15mL乙睛涡旋混匀1min，以4000r/min离心2min，转移上层溶液到50mL离心管中。残渣中 4000r/min离心2min，转移上层乙睛相到浓缩瓶中，40℃以下水浴减压浓缩至近干，残渣用3mL丙 酮-乙混合溶剂（3.9）溶解，待净化。 6.2 中性氧化铝固相萃取小柱净化 柱，调整流速在1mL/min左右。收集全部洗脱液。40℃以下水浴减压浓缩至近干，用甲醇-乙酸铵溶 液（3.8)溶解并定容至4.0ml，待测定。 6.3测定 6.3.1 色谱条件 a) 色谱柱：Cg，粒径5μm，150mmX4.6mm（内径），或相当的色谱柱； b) 流动相：A：甲醇，B:0.005mol/1的乙酸铵溶液，流动相梯度洗脱程序如表1； 表1 梯度洗脱程序 时间/min A% B/% 0. 00 70 30 8.00 90 10 8.10 100 0 15, 00 100 70 30 15.10 20,00 30 c) 流速：0.3mL/min； 2 SN/T 2572--2010 d) 进样量：20μL； e) 柱温：20℃； f) 扫描方式：正离子模式； 检测方式：多反应监测； g) 雾化气、气帘气、辅助气、碰撞气均为高纯氮气；监测离子对（m/2)和其他参考条件参见附 录 B。 6.3.2 LC/MS-MS测定 根据样液中待测物的含量，选定浓度相近的标准校正溶液，试液中待测物的响应值应在仪器检测的 线性范围内。校正溶液及样液等休积进样测定，在上述色谱条件下，氨基甲酸酯的色谱图参见附录C 图 C.1。 6.3.3 液相色谱-质谱确证 在上述液相色谱-串联质谱条件下进行测定，试液中待测物的保留时间应在校正溶液保留时间的时 间窗内，各离子对的相对丰度应与校正溶液的相对丰度一致，误差不超过表2中规定的范围。 表2 定性确证时相对离子丰度的最大允许误差 >50 >20~50 >10~20 10 相对离子丰度/% ±50 允许的相对误差/% ± 20 ± 25 ± 30 6.4 空白试验 除不加试样外，均按上述步骤进行。 结果计算和表述 7 采用外标法定量，按式(1)计算试样中氨基甲酸酯类农药的含量。计算结果需扣除空白值： AXXV (1) A,Xm 式中： 试样中被测组分的残留量，单位为豪克每千克（mg/kg）； X A 样液中氨基甲酸酯农药的峰面积： 校正溶液的浓度，单位为微克每拿升（pg/mL)； V 样品溶液最终定容体积，单位为毫升（mL)； A, 校正溶液中氨基甲酸酯农药的峰面积； 样品溶液所代表的试样质量，单位为克（g）。 m 8 测定低限、回收率 8. 1 测定低限 本方法对氨基甲酸酯类农药的测定低限均为0.01mg/kg。 3 SN/T 2572-2010 8.2 回收率 蜂王浆中添加0.01mg/kg~0.05mg/kg浓度水平时，回收率范围如表3。 表3 样品的添加浓度及回收率的实验数据 回收率/% 农药名称 0. 01 mg kg 0. 02 mg/kg 0. 05 mg/kg 灭多威 70, 3 ~ 89. 4 84. 296. 4 77.5~106 愚虫威 75.1~96. 2 85.3~98.0 77.7~91. 1 克百威 78.5~ 97.8 85. 4~93. 7 82.7~93.3 甲蔡威 72.6~97.2 93. 3~98. 3 81.4~90.5 抗蚜威 86.7~94. 9 73. 8 ~- 98. 0 84.5~100 异丙威 75, 0~93, 4 89. 6~102 89.0~103 仲丁威 77. 7~93, 7 97. 1~ 114 97.2~103 甲硫威 70. 9~ 85. 8 85. 0~~101 81.8~88.2 SN/T2572~~2010 附录A （资料性附录） 8种氨基甲酸酯类农药信息 表A.18种氨基甲酸酯类农药中英文通用名源、CAS编号、化学分子式、相对分子质量信息 农药通用名 英文通用名 CAS编号 化学分子式 相对分子质量 灭多威 16752-77 -5 C,HioN.O.S 162 methomyl 恶虫威 bendicarb C., His NO, 223 22781-23-3 克百威 1563 66-2 Ch2 Hs NO; 221 carbofuran 甲萘威 carbary! 63-25·2 Ch2 H, NO; 201 抗蚜威 pirimicarb 23103-98-2 Cn His N, O2 238 异丙威 isoprocarb 2631-405 C: His NO; 193 仲丁威 207 fenobucarb 3766-81-2 C H NO2 22.5 甲硫威 methiocarb 2.032-657 C. His NO,S 5