书 书 书犐犆犛 ５９ ． ０８０ ． ０１ 犠 ０４ 中华人民共和国国家标准 犌犅 ／ 犜 ２０９４４ ． ３ — ２００８ 纺织品 　 抗菌性能的评价 第 ３ 部分 ： 振荡法 犜犲狓狋犻犾犲狊 — 犈狏犪犾狌犪狋犻狅狀犳狅狉犪狀狋犻犫犪犮狋犲狉犻犪犾犪犮狋犻狏犻狋狔 — 犘犪狉狋 ３ ： 犛犺犪犽犲犳犾犪狊犽犿犲狋犺狅犱 ２００８  ０４  ２９ 发布 ２００８  １２  ０１ 实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布书 书 书前 　　 言 　　 ＧＢ ／ Ｔ２０９４４ 《 纺织品 　 抗菌性能的评价 》 分为三个部分 ： ——— 第 １ 部分 ： 琼脂平皿扩散法 ； ——— 第 ２ 部分 ： 吸收法 ； ——— 第 ３ 部分 ： 振荡法 。 本部分为 ＧＢ ／ Ｔ２０９４４ 的第 ３ 部分 。 本部分由中国纺织工业协会提出 。 本部分由全国纺织品标准化技术委员会基础分委会 （ ＳＡＣ ／ ＴＣ２０９ ／ ＳＣ１ ） 归口 。 本部分主要起草单位 ： 深圳市北岳海威化工有限公司 、 国家纺织制品质量监督检验中心 、 上海市纺 织科学研究院南方测试中心 、 中国人民解放军特种防护服装质量检测中心 、 杭州新华诺芙特卫生材料有 限公司 、 浙江笑雪服饰有限公司 、 浙江浪莎袜业有限公司 、 中国针织工业协会 。 本部分主要起草人 ： 邹海清 、 王俊起 、 王友斌 、 刘晨 、 张华 、 倪济云 、 李洪 、 盛军棋 、 刘爱莲 、 王智 。 本部分首次发布 。 Ⅰ 犌犅 ／ 犜 ２０９４４ ． ３ — ２００８ 纺织品 　 抗菌性能的评价 第 ３ 部分 ： 振荡法 １ 　 范围 ＧＢ ／ Ｔ２０９４４ 的本部分规定了采用振荡法测定纺织品抗菌性能的定量试验和评价方法 。 本部分适用于羽绒 、 纤维 、 纱线 、 织物 ， 以及特殊形状的制品等各类纺织产品 ， 尤其适用于非溶出型 抗菌纺织产品 。 本部分不涉及抗菌产品安全性的评价 。 ２ 　 规范性引用文件 下列文件中的条款通过 ＧＢ ／ Ｔ２０９４４ 的本部分的引用而成为本部分的条款 。 凡是注日期的引用文 件 ， 其随后所有的修改单 （ 不包括勘误的内容 ） 或修订版均不适用于本部分 ， 然而 ， 鼓励根据本部分达成 协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本 。 凡是不注日期的引用文件 ， 其最新版本适用于本 部分 。 ＧＢ ／ Ｔ１２４９０ 　 纺织品 　 色牢度试验 　 耐家庭和商业洗涤色牢度 （ ＧＢ ／ Ｔ１２４９０ — ２００７ ， ＩＳＯ１０５Ｃ０６ ： １９９４ ， ＭＯＤ ） ３ 　 术语和定义 下列术语和定义适用于 ＧＢ ／ Ｔ２０９４４ 的本部分 。 ３ ． １ 抗菌性能 　 犪狀狋犻犫犪犮狋犲狉犻犪犾犪犮狋犻狏犻狋狔 纺织品所具有的能抑制织物上的细菌生长繁殖的性能 。 ３ ． ２ 对照样 　 犮狅狀狋狉狅犾犳犪犫狉犻犮 用于验证试验微生物生长条件的 、 不经任何处理的 １００ ％ 棉织物 。 注 ： 已被证明采用色牢度试验用的棉标准贴衬织物 ， 经高温蒸煮和蒸馏水洗涤后作为对照样是合适的 。 ４ 　 安全预防措施 安全须知 ： 本试验所采用的试验菌能使人感染致病 ， 应采取一切必要的预防措施 ， 免除对人员和环 境的危害 ， 试验应由经过培训的人员进行 。 ５ 　 原理 将试样与对照样分别装入一定浓度的试验菌液的三角烧瓶中 ， 在规定的温度下振荡一定时间 ， 测定 三角烧瓶内菌液在振荡前及振荡一定时间后的活菌浓度 ， 计算抑菌率 ， 以此评价试样的抗菌效果 。 ６ 　 试验器具 ６ ． １ 　 分光光度计 ： 检测波长 ４７５ｎｍ 或 ６６０ｎｍ 适合于测试试验菌液的浓度 。 ６ ． ２ 　 恒温培养箱 ： 温控精度为 ±１℃ 。 ６ ． ３ 　 水浴锅 ： 温度能保持在 ４６℃±２℃ 。 ６ ． ４ 　 恒温振荡器 （ 摇床 ）： 温度精度为 ±１℃ 。 １ 犌犅 ／ 犜 ２０９４４ ． ３ — ２００８ ６ ． ５ 　 冰箱 ： 温度能保持在 ５℃ ～ １０℃ 。 ６ ． ６ 　 玻璃门冷藏箱 ： 温度能保持在 ５℃ ～ １０℃ 。 ６ ． ７ 　 高压灭菌锅 ： 温度能保持在 １２１℃ ， 压力能保持在 １０３ｋＰａ 。 ６ ． ８ 　 带塞三角烧瓶 ： 容量为 ２５０ｍＬ 。 ６ ． ９ 　 培养皿 ： 直径 ９０ｍｍ 。 ６ ． １０ 　 旋涡式振动器 。 ６ ． １１ 　 二级生物安全柜 。 ６ ． １２ 　 试管 、 吸管 、 烧瓶等实验室常用器具 。 ７ 　 培养基和试剂 试验所用试剂应是分析纯的或适合于微生物试验用的 。 试验用水应是纯水 ， 如蒸馏水 。 注 ： 建议使用现有商业化的脱水原料制备培养基 ， 并严格按照相关产品制造商的使用说明操作 。 ７ ． １ 　 营养肉汤 　　　　 牛肉膏 　　　　　　　　 ３ｇ 　　　　 蛋白胨 　　　　　　　　 ５ｇ 　　　　 蒸馏水 　　 （ 最终定容至 ） １０００ｍＬ 　　　　 灭菌后 ， ｐＨ 值为 ６．８±０．２ 。 ７ ． ２ 　 营养琼脂培养基 　　　　 牛肉膏 　　　　　　　　 ３ｇ 　　　　 蛋白胨 　　　　　　　　 ５ｇ 　　　　 琼脂粉 　　　　　　　　 １５ｇ 　　　　 蒸馏水 　　 （ 最终定容至 ） １０００ｍＬ 　　　　 灭菌后 ， ｐＨ 值为 ６．８±０．２ 。 ７ ． ３ 　 沙氏琼脂培养基 　　　　 葡萄糖 　　　　　　　　 ４０ｇ 　　　　 蛋白胨 　　　　　　　　 １０ｇ 　　　　 琼脂粉 　　　　　　　　 ２０ｇ 　　　　 蒸馏水 　　 （ 最终定容至 ） １０００ｍＬ 　　　　 灭菌后 ， ｐＨ 值为 ５．６±０．２ 。 ７ ． ４ 　 ０ ． ０３ 犿狅犾 ／ 犔犘犅犛 （ 磷酸盐 ） 缓冲液 　　　　 磷酸氢二钠 　　　　　　 ２．８４ｇ 　　　　 磷酸二氢钾 　　　　　　 １．３６ｇ 　　　　 蒸馏水 　　 （ 最终定容至 ） １０００ｍＬ 　　　　 灭菌后 ， ｐＨ 值为 ７．２ ～ ７．４ ， ５℃ ～ １０℃ 保存备用 。 ８ 　 试验菌种 ８ ． １ 　 菌种 革兰氏阳性细菌 ： 金黄色葡萄球菌 犛狋犪狆犺狔犾狅犮狅犮犮狌狊犪狌狉犲狌狊 （ ＡＴＣＣ６５３８ ）； 革兰氏阴性细菌 ： 大肠杆菌 犈狊犮犺犲狉犻犮犺犻犪犮狅犾犻 （ ８０９９ 或 ＡＴＣＣ１１２２９ 、 ＡＴＣＣ８７３９ 、 ＡＴＣＣ２９５２２ 三者 中的一种 ）， 或肺炎克雷白氏菌 犓犾犲犫狊犻犲犾犾犪狆狀犲狌犿狅狀犻犪犲 （ ＡＴＣＣ４３５２ ）， 根据需要 选一种 ； 白色念珠菌 犆犪狀犱犻犱犪犪犾犫犻犮犪狀狊 （ ＡＴＣＣ１０２３１ ）。 注 １ ： 可使用加入世界菌种保藏联合会 （ ＷＦＣＣ ） 的菌种保藏机构提供的 、 与上述菌种等效的试验菌 。 注 ２ ： 如果需要 ， 可采用其他的试验菌种 ， 培养基成分 、 培养温度和培养方法应根据要求调整 。 ２ 犌犅 ／ 犜 ２０９４４ ． ３ — ２００８ ８ ． ２ 　 菌种转种及保存 冻干菌激活后接种斜面试管培养 ， 然后贮存于冰箱 （ ５℃ ～ １０℃ ）， 作为保存菌 。 每一个月应转种一 次 ， 转种后放于冰箱 （ ５℃ ～ １０℃ ） 保存 ， 转种次数不应超过 １０ 代 。 若转种后保存时间超过一个月 ， 不能 用于下一次转种 。 ８ ． ３ 　 标识 对每个菌种应标注如下信息 ： ａ ） 　 供应冻干菌的菌种保藏机构名称 ； ｂ ） 　 冻干菌的名称和编号 ； ｃ ） 　 冻干菌的批号 ； ｄ ） 　 冻干菌激活日期 ； ｅ ） 　 保存菌的贮藏日期 ； ｆ ） 　 保存菌的实验室编号 。 ９ 　 试验菌液的准备 ９ ． １ 　 细菌菌液的培养和准备 ９ ． １ ． １ 　 两步预培养程序制备细菌接种菌悬液 从 ３ 代 ～ １０ 代的细菌保存菌种 （ ８．２ ） 试管斜面中取一接种环细菌 ， 在营养琼脂平板 （ ７．２ ） 上划线 。 于 ３７℃±１℃ ， 培养 １８ｈ ～ ２４ｈ 。 用接种环从平板中挑出一个典型菌落 ， 接种于 ２０ｍＬ 营养肉汤 （ ７．１ ） 中 。 ３７℃±１℃ ， １３０ｒ ／ ｍｉｎ ， 振荡培养 １８ｈ ～ ２０ｈ ， 即制成了接种菌悬液 。 菌液含量采用分光光度计法 或稀释法测定 ， 活菌数应达到 １×１０ ９ ＣＦＵ ／ ｍＬ ～ ５×１０ ９ ＣＦＵ ／ ｍＬ 。 此新鲜菌液应在 ４ｈ 内尽快使用 ， 以保证接种菌的活性 。 ９ ． １ ． ２ 　 细菌接种菌液的准备 用吸管从细菌悬液 （ ９．１．１ ） 中吸取 ２ｍＬ ～ ３ｍＬ （ 参考数值 。 由此步骤调整接种活菌数目 ， 大肠杆 菌取下限 ， 金黄色葡萄球菌取上限 ）， 移入装有 ９ｍＬ 营养肉汤 （ ７．１ ） 的试管中 ， 充分混匀 。 吸取 １ｍＬ 移 入另一支装有 ９ｍＬ 营养肉汤 （ ７．１ ） 的试管中 ， 充分混匀 。 吸取 １ｍＬ 移入装有 ９ｍＬ０．０３ｍｏｌ ／ ＬＰＢＳ 缓冲液 （ ７．４ ） 的试管中 ， 充分混匀 。 吸取 ５ｍＬ 移入装有 ４５ｍＬ０．０３ｍｏｌ ／ ＬＰＢＳ 缓冲液 （ ７．４ ） 的三角烧 瓶中 。 充分混匀 ， 稀释至含活菌数目 ３×１０ ５ ＣＦＵ ／ ｍＬ ～ ４×１０ ５ ＣＦＵ ／ ｍＬ （ 由此固定的 ４ 次稀释程序 ， 此接种菌液中含有微量的营养肉汤 ）， 用来对试样接种 。 此接种菌液应在 ４ｈ 内尽快使用 ， 以