(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211140991.4 (22)申请日 2022.09.20 (71)申请人 山东省中医药研究院 地址 250014 山东省济南市历下区燕子山 西路7号 (72)发明人 苏酩　刘善新　张新军　梁瑞雪　 李鑫蕊　王平　魏丕振　张国印　 杜新磊　谢亚欣　 (74)专利代理 机构 济南华典专利代理事务所 (普通合伙企业) 372 93 专利代理师 李景华 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/86(2006.01) (54)发明名称 达原饮基准样品超高效液相色谱特征图谱 的检测方法 (57)摘要 本发明涉及一种达原饮基准样品超高效液 相色谱特征图谱检测方法， 采用超高效液相色谱 法检测达原 饮基准样品的特征图谱， 供试品溶液 的制备， 参照物溶液的制备， 分别精密吸取参照 物溶液与供试品溶液1 ‑3ul， 注入超高效液相色 谱仪， 测定达原饮基准样品的特征图谱。 本发明 确立了13个共有峰， 通过对照品对照指认2、 3、 7、 12、 13号峰分别为芒果苷、 芍药苷、 黄芩苷、 汉黄 芩苷、 甘草酸； 通过饮片及各饮片的阴性对照， 确 定了各共有峰的归属， 采用超高效液相色谱技 术， 大大缩短分析时间， 仅35分钟， 且检测方法的 精密度、 稳定性、 重复性良好， 能够从整体上全面 的检测达原饮 基准样品。 权利要求书1页 说明书11页 附图9页 CN 115469033 A 2022.12.13 CN 115469033 A 1.达原饮基准样品超高效液相色谱特征图谱检测方法， 其特征在于： 采用超高效液相 色谱法检测达原饮 基准样品的特 征图谱， 具体步骤如下： 供试品溶液的制备： 取达原饮基准样品冻干粉0.1－0.2g， 精密称定， 加入70％甲醇30 ‑80ml， 超声处理20－ 30分钟， 放冷， 摇匀， 滤 过， 取续滤 液， 过0.2 2 μm滤膜， 即得； 参照物溶 液的制备： 取汉黄芩苷对照品适量， 精密称定， 加70％ 甲醇制成每1ml含汉黄芩苷20 ‑40 μg的溶液， 摇匀， 即得； 色谱条件： 色谱柱： C18超高效液相色谱柱； 流动相： A(乙腈) ‑B(0.2％酸水溶液)梯度洗脱， 条件如 下： 0‑7.5min： A  10→19； 7.5‑12min： A 19→22.5； 12‑23min： A 22.5→27； 23‑27min： A 27→ 56； 27‑35min： A 56→84； 流速： 0.2 ‑0.3mL·min‑1； 检测波长： 240 ‑270nm； 柱温： 25 ‑35℃； 测定法： 分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液1 ‑3ul， 注入超高效液相 色谱仪， 测定 达原饮基准样品的特征图谱， 供试品溶液的色谱中应呈现13个特征峰， 13个特征峰中， 峰2、 峰3、 峰7、 峰12、 峰13分别为黄 芩苷、 汉黄 芩苷、 芒果苷、 甘草 酸铵、 芍药苷。 2.达原饮基准样品超高效液相色谱特征图谱检测方法， 其特征在于： 供试品特征图谱 中应呈现13个特征峰， 与参照物相应的峰为S峰， 计算各特征峰与S峰 的相对保留时间， 应在 规定值的 ±5％范围之内， 相对保留时间规定值为： 0.13(峰1)、 0.24(峰2)、 0.32(峰3)、 0.42 (峰4)、 0.47(峰5)、 0.49(峰6)、 0.71(峰7)、 0.83(峰8)、 0.86(峰9)、 0.88(峰10)、 0.91(峰 11)、 1(峰12)、 1.32(峰13)。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115469033 A 2达原饮基准样品超高 效液相色谱特征图谱的检测方 法 技术领域 [0001]本发明涉及基准样品的检测技术领域， 具体涉及 一种达原饮基准样品超高效液相 色谱特征图谱检测方法。 背景技术 [0002]达原饮出自祖国医学第一部系统研究急性传染病的温病学专著 《瘟疫论》 ， 作者为 明末名医吴又可。 达原饮既是 《瘟疫论》 首方， 也是吴氏创方制疫最有代表性的方剂 。 该方是 为瘟疫秽浊毒邪伏于膜原而设， 用于瘟疫或疟疾， 邪伏膜原之憎寒壮热， 胸闷呕恶， 头痛烦 躁， 脉弦数， 舌边深红， 苔垢腻等症， 具有开达膜原、 辟秽化浊之功。 达原饮自创立以来， 流传 至今， 现代临床仍然广泛应用。 《瘟疫论》 记载 “君药槟榔(二钱)、 臣药厚朴(一钱)、 草果(五 分)； 佐药知母、 芍药(白芍)、 黄芩(各一钱)； 使药甘草(五分) ”组成， 煎煮 “水二盅， 煎八分， 午后温服 ”。 [0003]处方剂量换算经文献考证及 《古代经典名方关键信息(7首方剂)》 明确明清时期的 1两折算成现代重量为37.3g， 十钱等于一两， 一盅为200mL， 即： 槟榔7.46g， 厚朴3.73g、 草果 仁1.87g、 知母3.73g、 白芍 3.73g、 黄 芩3.73g、 甘草1.87g， 以水40 0mL， 煎至16 0mL。 [0004]基准样品是嫁接传统经方和现代制剂的桥梁， 是衡量现代制剂质量与传统经方煎 液质量是否一 致的基准。 [0005]目前， 现有技术中， 申请号为201610857129.3的中国专利文献， 公开了达原饮组合 物指纹图谱的建立方法及指纹图谱， 其存在的缺陷是分析时间长， 时长 达95分钟。 发明内容 [0006]为克服所述不足， 本发明的目的在于提供一种达原饮基准样品超高效液相色谱特 征图谱检测方法， 能够有效检测达原饮 基准样品的整体质量， 且重复性 好。 [0007]本发明解决其技术问题所采用的技术方案是： 一种达原饮基准样品超高效液相色 谱特征图谱检测方法， 包括： [0008]步骤1、 制备 供试样品溶 液、 处方饮片溶 液 [0009]制备供试样品溶液， 取达原饮基准样品冻干粉， 精密称定， 加入70％甲醇， 超声处 理， 放冷、 摇匀、 过 滤， 取续滤 液， 过滤膜， 得供试样品溶 液； [0010]制备参照物溶液， 精密称取汉黄芩苷为参照物， 分别用70％甲醇溶解配制制备参 照物溶液。 [0011]步骤2、 采用高效液相色谱法测供试样品溶液、 参照物溶液的液相色谱图， 所述高 效液相色谱法的色谱条件为： [0012]色谱柱： C18超高效液相色谱柱； [0013]流动相： A(乙腈) ‑B(0.2％酸水溶液)梯度洗脱， 洗脱条件如下： 0 ‑7.5min： A  10→ 19； 7.5‑12min： A 19→22.5； 12‑23min： A 22.5→27； 23‑27min： A 27→56； 27‑35min： A 56→ 84；说　明　书 1/11 页 3 CN 115469033 A 3