(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211107855.5 (22)申请日 2022.09.13 (71)申请人 中国人民解 放军军事科学院军事医 学研究院 地址 100850 北京市海淀区太平路27号院 (72)发明人 车津晶　原梅　于岳洋　王圣杰　 李娜　 (74)专利代理 机构 北京高沃 律师事务所 1 1569 专利代理师 申素霞 (51)Int.Cl. G01N 33/48(2006.01) G01N 30/02(2006.01) (54)发明名称 基于二氧化钛微球提取血浆中脂质体并测 定游离药物、 包裹药物和总药物含量的方法 (57)摘要 本发明提供了基于二氧化钛微球提取血浆 中脂质体并测定游离药物、 包裹药物和总药物含 量的方法， 属于分析检测技术领域。 本发明将二 氧化钛微球、 稀释液、 酸性缓冲溶液与含有脂质 体的血浆样 本混合进行孵育， 经固液分离得到表 面富集有脂质体的二氧化钛微球以及液体物料； 将所述表面富集有脂质体的二氧化钛微球进行 破乳处理， 测定所得破乳体系中药物含量， 得到 所述包裹药物含量； 测定所述液体物料中药物含 量， 得到所述游离药物的含量。 本发明利用二氧 化钛微球与脂质体结合， 从而实现对脂质体的高 效提取， 基于此可 以简单、 准确地对脂质体内包 裹的药物含量进行单独测定， 在此基础上还可以 得到血浆中游离药物含量。 权利要求书1页 说明书7页 CN 115420886 A 2022.12.02 CN 115420886 A 1.基于二氧化钛微球提取血浆中脂质体并测定游离药物、 包裹药物和总药物含量的方 法， 包括以下步骤： 将二氧化钛微球、 稀释液、 酸性缓冲溶液与含有脂质体的血浆样本混合， 将所得混合料 液进行孵 育， 经固液分离得到表面 富集有脂质体的二氧化 钛微球以及液体物料； 将所述表面富集有脂质体的二氧化钛微球进行破乳处理， 测定所得破乳体系中药物含 量， 得到所述包裹药物含量； 测定所述液体物料中药物含量， 得到所述游离药物的含量。 2.根据权利要求1所述的方法， 其特 征在于， 所述 二氧化钛微球的粒径为5～10 μm。 3.根据权利要求2所述的方法， 其特征在于， 所述二氧化钛微球具有孔结构， 孔径为8～ 10nm。 4.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述含有脂质体的血浆样本 中脂质体的浓 度为15～80 00ng/mL。 5.根据权利要求4所述的方法， 其特征在于， 所述二氧化钛微球与含有脂质体的血浆样 本的用量比为3mg： (3 5～45)μL。 6.根据权利要求4所述的方法， 其特征在于， 所述稀释液和酸性缓冲 溶液的总体积与含 有脂质体的血浆样本的体积比为(1～6)： 1。 7.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述酸性缓冲溶液为乙酸 ‑乙酸钠缓冲溶 液， 所述稀释液为 生理盐水稀释液。 8.根据权利要求1所述的方法， 其特 征在于， 所述混合料 液的pH值 为2.5～7。 9.根据权利要求1～8任一项所述的方法， 其特征在于， 所述孵育的温度为2～8℃， 时间 为5～60min。 10.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述破乳处理采用的破乳剂包括甲醇、 乙 醇或乙腈。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115420886 A 2基于二氧化 钛微球提取血浆中脂质体并测定游离 药物、 包裹 药物和总药物含量的方 法 技术领域 [0001]本发明涉及分析检测技术领域， 具体涉及基于二氧化钛微球提取血浆中脂质体并 测定游离药物、 包裹药物和总药物含量的方法。 背景技术 [0002]多西他赛(docetaxel， DTX)是 由紫杉针叶提取物经半合成得到的活性化合物， 目 前为紫杉醇类抗乳腺癌治疗的一线药物， 其作用机制与紫杉醇类似， 但抗肿瘤活性比紫杉 醇更强。 目前多西他赛市售制剂为注射剂， 主要用于治疗晚期乳腺癌、 卵巢癌、 非小细胞肺 癌、 头颈癌以及小细胞肺癌， 对胃癌、 胰腺癌以及黑色素瘤等也有一定疗效。 多西他赛的水 溶性较差， 故其市售制剂的处方为多西他赛、 乙醇和吐温 ‑80。 但由于乙醇和吐温 ‑80的存 在， 在临床应用过程中患者 易发生过 敏反应以及体液 潴留等严重不良反应。 [0003]脂质体是一种由磷脂双分子层包裹形成的囊泡结构， 其中磷脂双分子层由具有亲 水头部和疏水尾部的类脂分子自组装形成， 亲水头部紧密排列形成膜的外表面层和内表面 层， 疏水尾部处于膜的中间。 这种特殊的膜结构使得脂质体不仅可以携带亲水性物质， 还可 以携带疏水性物质和两亲性物质。 因此脂质体在实现靶向给药、 缓释给药、 提高难溶性药物 与多肽药物的生物利用度、 减轻药物不良反应等方面表现出良好的应用前景。 目前多西他 赛脂质体已经应用于临床 研究， 其处方中辅料包括脂溶性辅料、 水溶性辅料和长循环辅料， 其中脂溶性辅料和水溶性辅料能够将多西他赛包裹， 从而增加多西他赛的水溶性， 长循环 辅料能够延长多西他 赛在体内的时间。 [0004]近年来虽然在脂质体的设计、 合成方面不断取得进展， 但脂质体在体内的吸收、 分 布、 代谢和排泄(ADME)过程尚不十分清楚。 药物的药效和毒性主要取决于药物在体内的浓 度， 而药物在体内的浓度主要取决于给药剂量和药物的ADME过程， 因此药代动力学研究对 于药物的药效和毒性评价至 关重要。 对于脂质体而言， 进入机体后至少存在三种形态， 即释 放出的游离药物、 脂质体颗粒(即完整的脂质体)以及构成脂质体的聚合物材料。 因此分离 血浆中包裹在脂质体里与游离的药物对脂质体的药代动力学研究至关重要。 [0005]常规使用的蛋白质沉淀法只能测定脂质体中药物的总含量， 而无法单独测定包裹 在脂质体里的药物含量， 不便于 分析生物体内脂质体的分布情况。 固相萃 取(SPE)是分离血 浆中脂质体包裹的药物和游离药物的常用方法。 脂质体表面通常被亲水基团所覆盖， 极性 大， 在反相SPE柱上没有保留， 而游离药物极性小， 能够保留在反相SPE柱上， 利用二者保留 行为的差异， 可以实现有效分离。 但固相萃取的回收率较差， 难以实现较低的定量下限 (LLOQ)， 且实验过程复杂不具备普适性。 因此， 如 何简单、 准确地对脂质体内包裹的药物含 量进行单独测定， 是目前亟需解决的技 术问题。 发明内容 [0006]本发明的目的在于提供一种基于二氧化钛微球提取血浆中脂质体并测定游离药说　明　书 1/7 页 3 CN 115420886 A 3