(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211156427.1 (22)申请日 2022.09.22 (71)申请人 广东一方制药有限公司 地址 528244 广东省佛山市南海区里 水镇 旗峰工业 开发区 (72)发明人 何民友　邓淙友　李振雨　曲丽媛　 刘晓霞　周湘媛　黄彩莹　师若云　 王闽予　蓝金权　 (74)专利代理 机构 华进联合专利商标代理有限 公司 44224 专利代理师 秦冉冉 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/86(2006.01) (54)发明名称 不同基原白薇、 老瓜头的指纹图谱的构建方 法和鉴别方法 (57)摘要 本发明涉及一种不同基原白薇、 老瓜头的指 纹图谱的构建方法和鉴别方法。 所述不同基原白 薇或老瓜头的指纹图谱的构建方法， 包括如下步 骤： 取对羟基苯乙酮对照品、 2,4 ‑二羟基苯乙酮 对照品和4 ‑甲氧基‑3‑羟基苯乙酮对照品， 以第 一溶剂溶解， 制备对照品溶液； 取不同基原白薇 或老瓜头的样品， 以第二溶剂提取， 制备供试品 溶液； 对所述对照品溶液和供试品溶液进行超高 效液相色谱检测， 构建所述不同基原白薇或老瓜 头的指纹图谱； 其中， 所述超高效液相色谱检测 的条件包括： 流动相A为甲醇、 流动相B为体积浓 度0.08％～0.12％的磷酸水溶液， 进行梯度洗 脱。 该构建方法构建获得的指纹图谱能够用于不 同基原白薇、 老瓜 头的鉴别。 权利要求书2页 说明书16页 附图19页 CN 115541746 A 2022.12.30 CN 115541746 A 1.一种不同基原白薇或老瓜头的指纹图谱的构建方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： 取对羟基苯乙酮对照品、 2,4 ‑二羟基苯乙酮对照品和4 ‑甲氧基‑3‑羟基苯乙酮对照品， 以第一溶剂溶解， 制备对照品溶 液； 取不同基原白薇或老瓜头的样品， 以第二溶剂提取， 制备 供试品溶液； 对所述对照品溶液和供试品溶液进行超高效液相色谱检测， 构建所述不同基原白薇或 老瓜头的指纹图谱； 其中， 所述超高效液相色谱检测的条件包括： 流动相A为甲醇、 流动相B为体积浓度 0.08％～0.12％的磷酸水 溶液， 进行梯度洗脱。 2.根据权利要求1所述的不同基原白薇或老瓜头的指纹图谱的构建方法， 其特征在于， 所述梯度洗脱包括如下洗脱程序： 0～3min， 流动相A的体积百分比由3％变化至 5％； 3～8min， 流动相A的体积百分比由5％变化至12％； 8～13min， 流动相A的体积百分比由12％变化至20％； 13～21min， 流动相A的体积百分比由20％变化至25％； 21～26min， 流动相A的体积百分比保持在25％； 26～33min， 流动相A的体积百分比由25％变化至40％； 33～35min， 流动相A的体积百分比保持在40％。 3.根据权利要求1所述的不同基原白薇或老瓜头的指纹图谱的构建方法， 其特征在于， 所述超高效液相色谱检测的条件还包括： 色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂； 进一 步地， 所述色谱柱的规格包括： 柱长为10 0mm或150mm， 内径为2.1m m， 粒径为1.7 μm～1.9 μm。 4.根据权利要求1所述的不同基原白薇或老瓜头的指纹图谱的构建方法， 其特征在于， 所述超高效液相色谱检测的条件还包括： 流速为0.28～0.32mL/min； 柱温为27℃ ～33℃； 检 测波长为3 05nm～315nm。 5.根据权利要求1所述的不同基原白薇或老瓜头的指纹图谱的构建方法， 其特征在于， 以第二溶剂提取的方法具有如下 所示特征中的至少一项： (1)所述第二溶剂为体积浓度为45％～55％的甲醇水溶液或体积浓度为5％～15％的 乙醇水溶液； (2)提取的方式为超声处 理或回流 提取； (3)提取的时间为15mi n～60min； (4)所述第二溶剂与不同基原白薇或老瓜头的样品的体积质量比为20～3 0mL/g。 6.根据权利要求1所述的不同基原白薇或老瓜头的指纹图谱的构建方法， 其特征在于， 所述第一溶剂选自醇类溶剂中的一种或多种。 7.根据权利要求1～6任一项所述的不同基原白薇或老瓜头的指纹图谱的构建方法， 其 特征在于， 所述不同基原白薇的样品包括： 白薇药材、 白薇标准汤剂、 白薇配方颗粒、 蔓生白 薇药材、 蔓生白薇标准汤剂和蔓生白薇配方颗粒中的一种或多种； 所述老瓜头的样品包括 老瓜头药 材、 老瓜头标准汤 剂和老瓜头配方颗粒中的一种或多种。 8.一种不同基原白薇或老瓜头的鉴别方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： 取待测样品， 以第二溶剂提取， 制备待测品溶 液； 对所述待测品溶液进行超高效液相色谱检测， 根据检测获得的色谱图中的特征 峰进行权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115541746 A 2鉴别； 其中， 所述超高效液相色谱检测的条件包括： 流动相A为甲醇、 流动相B为体积浓度 0.08％～0.12％的磷酸水 溶液， 进行梯度洗脱。 9.根据权利要求8所述的不同基原白薇或老瓜头的鉴别方法， 其特征在于， 所述梯度洗 脱包括如下洗脱程序： 0～3min， 流动相A的体积百分比由3％变化至 5％； 3～8min， 流动相A的体积百分比由5％变化至12％； 8～13min， 流动相A的体积百分比由12％变化至20％； 13～21min， 流动相A的体积百分比由20％变化至25％； 21～26min， 流动相A的体积百分比保持在25％； 26～33min， 流动相A的体积百分比由25％变化至40％； 33～35min， 流动相A的体积百分比保持在40％。 10.根据权利要求8所述的不同基原白薇或老瓜头的鉴别方法， 其特征在于， 所述超高 效液相色谱检测的条件还包括： 色谱柱以十 八烷基硅烷键合硅胶为填充剂； 进一步地， 所述 色谱柱的规格包括： 柱长为10 0mm或150mm， 内径为2.1m m， 粒径为1.7 μm～1.9 μm。 11.根据权利要求8所述的不同基原白薇或老瓜头的鉴别方法， 其特征在于， 所述超高 效液相色谱检测的条件还包括： 流速为0.28～0.32mL/min； 柱温为27℃ ～33℃； 检测波长为 305nm～315nm。 12.根据权利要求8所述的不同基原白薇或老瓜头的鉴别方法， 其特征在于， 以第二溶 剂提取的方法具有如下 所示特征中的至少一项： (1)所述第二溶剂为体积浓度为45％～55％的甲醇水溶液或体积浓度为5％～15％的 乙醇水溶液； (2)提取的方式为超声处 理或回流 提取； (3)提取的时间为15mi n～60min； (4)所述第二溶剂与待测样品的体积质量比为20～3 0mL/g。 13.根据权利要求8～12任一项所述的不同基原白薇或老瓜头的鉴别方法， 其特征在 于， 根据检测获得的色谱图中的特征峰进行鉴别是指根据对羟基苯乙酮的特征峰和/或2, 4‑二羟基苯乙酮的特 征峰进行鉴别。 14.根据权利要求13所述的不同基原白薇或老瓜头的鉴别方法， 其特征在于， 根据检测 获得的色谱图中的特 征峰进行鉴别的方法包括如下一项或两项： (1)若检测获得的色谱图中包括对羟基苯乙酮的特征峰和/或2,4 ‑二羟基苯乙酮的特 征峰， 所述待测样品为白薇； 若检测获得的色谱图中不包括对 羟基苯乙酮的特征峰和/或2, 4‑二羟基苯乙酮的特 征峰， 所述待测样品为老瓜头； (2)以对羟基苯乙酮的特征峰为S峰， 计算2,4 ‑二羟基苯乙酮的特征峰的相对峰面积， 若所述2,4 ‑二羟基苯乙酮的特征峰的相对峰面积≥0.10， 所述待测样品为白薇； 若所述2, 4‑二羟基苯乙酮的特 征峰的相对峰面积＜0.10， 所述待测样品为蔓生白薇。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115541746 A 3