(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211204954.5 (22)申请日 2022.09.29 (71)申请人 广西中医药大学百年乐制药有限公 司 地址 530000 广西壮 族自治区南宁市东葛 路60号 (72)发明人 罗宇东　陈晓艺　韦雯怡　谭安蔷　 邹意华　 (74)专利代理 机构 北京华仁联合知识产权代理 有限公司 1 1588 专利代理师 王小芳 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/30(2006.01)G01N 30/32(2006.01) G01N 30/34(2006.01) G01N 30/74(2006.01) G01N 30/86(2006.01) (54)发明名称 一种蠲痹汤物质基准HPLC指纹图谱及测定 方法 (57)摘要 本发明提出了一种蠲痹汤物质基准HPLC指 纹图谱及测定方法， 属于中药分析技术领域。 包 括： S1.对照品溶液的制备； S2.供试品溶液的制 备； S3.色谱条件； S4.测定。 本发明蠲痹汤物质基 准的指纹图谱测定方法专属性强， 重现性、 稳定 性均较好， 方法简便， 可更好地控制本品内在质 量的目的， 故将蠲痹汤物质基准的指纹图谱测定 作为本品的质量控制的方法。 权利要求书1页 说明书6页 附图2页 CN 115436527 A 2022.12.06 CN 115436527 A 1.一种蠲痹汤物质基准HPLC指纹图谱的测定方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： S1.对照品溶液的制备： 精密称定绿原酸、 龙胆苦苷、 阿魏酸、 甘草苷、 洋川芎内脂I适 量， 加甲醇溶解， 分别制成混合对照品溶 液； S2.供试品溶液的制备： 精密称定蠲痹汤物质基准， 置于容量瓶中， 加入甲醇定容， 超声 提取， 放冷至室温， 补足减失的重量， 摇匀， 过 滤， 即得供试品溶液； S3.色谱条件： 采用AgilentZORBAXSB ‑C18柱， 流动相A相为乙腈， B相为0.05 ‑0.15wt％ 的甲酸溶液， 采用梯度洗脱， 流速为0.5 ‑1.5ml/min， 柱温为28 ‑32℃， 检测波长： 280 ‑320nm； 进样量为5‑15 μl； S4.测定： 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液， 注入高效液相色谱仪， 按照步骤S3 所述色谱条件测定， 即得。 2.根据权利要求1所述的测定方法， 其特征在于， 步骤S 1中所述混合对照品溶液中绿原 酸、 龙胆苦苷、 阿魏酸、 甘草苷、 洋川芎内脂I的浓度为0.19 ‑0.21mg/ml、 0.19 ‑0.21mg/ml、 0.19‑0.21mg/ml、 0.09 ‑0.11mg/ml、 0.09 ‑0.11mg/ml。 3.根据权利要求1所述的测定方法， 其特征在于， 步骤S2中所述超声提取时间为30 ‑ 50min， 功率为180‑220W， 频率 为35‑45kHz。 4.根据权利 要求3所述的测定方法， 其特征在于， 步骤S2中所述超声提取时间为40min， 功率为200W， 频率为40kHz。 5.根据权利要求1所述 的测定方法， 其特征在于， 步骤S3中所述AgilentZORBAXSB ‑C18 柱的规格为25 0mm×4.6mm， 粒径为5 μm。 6.根据权利要求1所述的测定方法， 其特征在于， 步骤S3中所述色谱条件： 采用 AgilentZORBAXSB ‑C18柱， 流动相A相为乙腈， B相为0.1wt％的甲酸溶液， 采用梯度洗脱， 流 速为1ml/mi n， 柱温为3 0℃， 检测波长： 3 00nm； 进样量 为10 μl。 7.根据权利 要求1所述的测定方法， 其特征在于， 步骤S3中所述梯度洗脱条件为： 5min， 5％A相； 5 →20min， 5→12％A相； 2 0→40min， 12 →20％A相； 40 →50min， 20％A相； 50 →65min， 20→90％A相； 6 5→80min， 90％A相。 8.一种如权利要求1 ‑7任一项所述的测定方法得到的蠲痹汤物质基准HPLC指纹图谱。 9.根据权利要求8所述的蠲痹汤物质基准HPLC指纹图谱， 其特征在于， 所述图谱上共生 成11个共有特 征峰， 从左至右 依次编号， 第6号色谱峰为阿魏酸。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115436527 A 2一种蠲痹汤物质基准 HPLC指纹图谱 及测定方 法 技术领域 [0001]本发明涉及中药分析技术领域， 具体涉及一种蠲痹汤物质基准HPLC指纹图谱及测 定方法。 背景技术 [0002]蠲痹汤出自清代程国彭所撰综合性医书 《医学心悟》 卷三 “痹(鹤膝风) ”篇。“通治 风寒湿三气， 合而成痹 ”。 组成为羌活、 独活各一钱， 桂心五分， 秦艽一钱， 当归三钱， 川芎七 分， 甘草五分(炙)， 海风藤二钱， 桑枝三钱， 乳香、 木香各八分。 主治中风身体烦痛， 项背拘 急， 手足冷痹， 腰膝沉重， 举动艰难。 方中羌活、 独活、 秦艽、 肉桂祛风散寒胜湿； 当归、 川芎、 乳香理气 养血、 活血止痛； 桑枝、 海风藤通经 活络止痛。 现代药理研究证明： 羌活水溶性成分 能抑制迟发型变态反应及炎症反应； 独活水提物具有抗炎镇痛作用； 当归和川芎中的阿魏 酸具有增强心肌的血液供应、 缓解心肌缺血的作用； 秦艽具有抗炎、 镇痛、 解热作用， 通过神 经体液系统间接影响脑垂体， 促使肾上腺皮质功能加强， 皮质激素分泌增加； 全方具有抗 炎、 镇痛、 调节免疫、 改善微循环作用， 从而增加神经 组织供血供氧， 促进周围神经损伤的修 复， 是临床上治疗风寒湿痹的常用方剂， 具有疏风散寒、 祛 湿宣痹之功效。 [0003]蠲痹汤属于2018 年国家中医药管理局会同国家药 品监督管理局制订 《古代经典名 方目录(第一批)》 中的100首经典名方第79首。 经典名方是指以古代医籍记载的古代经典名 方制备方法为依据制备而得的中药药用物质的标准， 除成型工艺外， 其余制备方法应当与 古代医籍记载基本一致。 成型工艺一般采用冷冻干燥、 喷雾干燥等不破坏物质组成的方式。 经典名方临床疗效确切， 运用现代科学技术将经典名方开发承携带方便、 便于服用的中药 制剂， 不仅是对中医药的传 承， 也能更好的促进 经典名方的临床 应用。 颗粒剂制备工艺相对 简单、 易赋形， 服用、 携带方便， 在服用形式上与传统汤剂最为一致， 能较大限度的保留传统 汤剂的优点， 因此以汤 剂形式服用的经典名方选择颗粒剂最 为适宜。 [0004]中药指纹图谱是控制中药质量的重要分析手段， 可确保其内在质量均一和稳定。 经过十几年的研究和运用， 该项技术已日趋成熟， 在中药质量标准控制中得到更广泛应用。 中药指纹图谱的制作和应用常包括： (1)采集具有代表 性的中药样品， 采取适当的方法制备 供试品溶液， 根据确定的分析方法， 对一定批次的中药样品进 行分析， 将所得的多批次数据 进行处理， 得到标准指纹图谱； (2)将样品按照与标准指纹图谱制作相同的方法进 行样品处 理、 分离分析后， 将所得的指纹图谱与标准指纹图谱进行相似度比较， 一般相以度大于0.9 即可视为该样品为合格。 目前关于蠲痹汤的指纹图谱文献甚少， 关于该方的成分分析以及 质量控制方面也尚无报道。 因此， 该方具有较大 的开发价值。 为了更全面、 更有效地控制蠲 痹汤制剂临床用药 的质量， 使其安全性和疗效更加有所保障， 需要对蠲痹汤组合物采用更 为先进的质量检测手段， 达 到有效地控制蠲痹汤制剂产品质量的目的。 发明内容 [0005]本发明的目的在于提出一种蠲痹汤物质基准HP LC指纹图谱及测定方法， 蠲痹汤物说　明　书 1/6 页 3 CN 115436527 A 3