(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211135016.4 (22)申请日 2022.09.19 (71)申请人 九三食品股份有限公司 地址 150000 黑龙江省哈尔滨市开发区哈 平路集中区哈平东路1号 (72)发明人 由振辉　罗淑年　王雪　安科峰　 夏雷　焦春刚　 (74)专利代理 机构 北京超凡宏宇专利代理事务 所(特殊普通 合伙) 11463 专利代理师 郭莲梅 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/64(2006.01) G01N 30/74(2006.01)G01N 30/86(2006.01) (54)发明名称 一种植物油中维生素A含量的检测方法 (57)摘要 本发明公开了一种植物油中维生素A含量的 检测方法， 涉及仪器分析技术领域。 本发明根据 维生素A醋酸酯的吸收波长、 分子质量、 可溶性等 相关理化性质， 开发一种基于高效液相色谱法的 植物油中营养强化剂维生素A醋酸酯的检测纯化 方法， 通过换算系数得到维生素A含量； 利用N ‑丙 基乙二胺和无键合硅胶对待测样品进行处理， 在 色谱柱内各成分被 分离净化后， 得到分离净化后 的维生素A醋酸酯进入检测器进行检测， 得到相 关数据进行相关计算， 得到维生素A含量。 采用本 发明提供的方法， 相对于 现有技术能够显著提高 维生素A检测的精确度， 提高回收率， 适合于推广 应用。 权利要求书2页 说明书9页 附图2页 CN 115508468 A 2022.12.23 CN 115508468 A 1.一种植物油中维生素A含量的检测方法， 其特 征在于， 包括： 利用维生素A醋酸酯标准品配置维生素A醋酸酯标准工作溶 液； 将植物油试样用第一有机溶剂溶解之后得到待净化溶液， 将所述待净化溶液与N ‑丙基 乙二胺和无键合硅胶混合、 过 滤得到待测溶 液； 将所述维生素A醋酸酯标准工作溶液注入高效液相色谱仪 中， 测定相应的峰面积， 以峰 面积为纵坐标， 以标准测定液浓度为横坐标绘制标准曲线， 计算 直线回归方程； 将所述待测溶液注入高效液相色谱仪 中测得峰面积， 采用外标法利用标准曲线计算浓 度， 试样中维生素A的含量按照下式计算： 式中： X表示试样中维生素A的含量， 单位 为微克每千克( μg/kg)； ρ 表示根据 标准曲线计算得到的试样中维生素A醋酸酯的浓度， 单位为微克每毫升( μg/ mL)； V表示定容体积， 单位 为毫升(mL)； f表示稀释倍数； 1000表示试样中量以每10 00克计算的换算系数； m表示试样的称 样量， 单位 为克(g)； 1.147表示维生素A醋酸酯转换为维生素A系数。 2.根据权利要求1所述的检测方法， 其特征在于， 所述待测溶液制备过程中， 控制所述 待净化溶液的浓度为0.05 ‑0.15g/mL， 每1mL所述待净化溶液对应所述N ‑丙基乙二胺的用量 为40‑60mg， 所述无键合硅胶的用量 为5‑15mg； 优选地， 所述待测溶液制 备过程中， 控制所述待净化溶液的浓度为0.08 ‑0.12g/mL， 每 1mL所述待净化溶液对应所述N ‑丙基乙二胺的用量为45 ‑55mg， 所述无键合硅胶的用量为8 ‑ 12mg。 3.根据权利要求2所述的检测方法， 其特征在于， 所述待测溶液的制备过程包括： 将所 述植物油试样均质后与第一有机溶剂混合定容得到所述待 净化溶液， 将所述待净化溶液与 所述N‑丙基乙二胺和所述无键合硅胶混合漩涡震荡2 ‑5min， 再经0.2 ‑0.3 μm有机系滤膜过 滤； 其中， 在所述待测溶液制备过程中， 所用第一有机溶剂选自丙酮、 三氯甲烷和二氯甲烷 中的至少一种。 4.根据权利要求1所述的检测方法， 其特征在于， 在利用高效液相色谱仪进行检测时， 检测器波长为325 ‑335nm； 优选地， 检测器波长为326 ‑330nm。 5.根据权利要求4所述的检测方法， 其特征在于， 在利用高效液相色谱仪进行检测时的 色谱条件如下： 色谱柱为C18， 柱长为140 ‑160mm， 内径为4 ‑6 μm， 填充物粒径为3.5 ‑4.5 μm， 柱温为25 ‑35 ℃， 或等效色谱柱； 流动相包括乙腈和甲醇， 乙腈和甲醇的体积比为7:2.5 ‑3.5， 流速为0.5 ‑1.5mL/mi n；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115508468 A 2进样量为15‑25 μL。 6.根据权利要求4所述的检测方法， 其特征在于， 在利用高效液相色谱仪进行检测时的 色谱条件如下： 色谱柱为C18， 柱长为145 ‑155mm， 内径为4.5 ‑5.5μm， 填充物粒径为3.8 ‑4.0μm， 柱温为 28‑32℃； 流动相包括乙腈和甲醇， 乙腈和甲醇的体积比为7:2.8 ‑3.2， 流速为0.8 ‑1.2mL/mi n； 进样量为18‑22 μL。 7.根据权利要求5或6所述的检测方法， 其特征在于， 所述检测器选自带二极管阵列检 测器、 带紫外检测器和荧 光检测器中的任意 一种。 8.根据权利要求1所述的检测方法， 其特征在于， 所述维生素A醋酸酯标准工作溶液的 浓度包括0.10‑0.30 μg/mL、 0.40 ‑0.60 μg/mL、 0.80 ‑1.20 μg/mL、 1.50 ‑2.50 μg/mL、 3.00 ‑5.00 μg/mL和5.5 0‑7.00 μg/mL。 9.根据权利要求8所述的检测方法， 其特征在于， 所述维生素A醋酸酯标准工作溶液的 配置过程包括： 将维生素A醋酸酯标准品与第二有机溶剂混合溶解后定容得到浓度为0.4 ‑ 0.6mg/L的维生素A醋酸酯标准储备 溶液； 取所述维生素A醋酸酯标准储备溶液进行稀释得到浓度为5 ‑15 μg/mL的维生素A醋酸酯 标准溶液中间液； 取不同量的所述维生素A醋酸酯标准溶 液中间液稀释至不同浓度； 其中， 所述第二有机溶剂选自乙醇、 甲醇、 丙酮中的至少一种； 用于稀释所述维生素A醋酸酯标准储备溶液的溶剂和用于稀释所述维生素A醋酸酯标 准溶液中间液的溶剂均选自乙醇、 甲醇、 丙酮中的至少一种。 10.根据权利要求9所述的检测方法， 其特征在于， 所述维生素A醋酸酯标准储备溶液在 使用之前进行浓度校正， 校正方法如下： 将所述维生素A醋酸酯标准储备溶液用第三有机溶剂稀释后， 以所述第三有机溶剂作 为空白参比， 以326 ‑330nm的测试波长测定吸光度， 维生素A醋酸酯标准稀释液的浓度按照 下式计算： 式中： X表示维生素A醋酸酯标准稀释液的浓度， 单位 为微克每毫升( μg/mL)； A表示维生素A醋酸酯稀释液的平均紫外吸光 值； 104表示换算系数； E表示维生素A醋酸酯1％比色光系数190 0； 其中， 所述第二有机溶剂选自无 水乙醇、 甲醇、 丙酮中的至少一种。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115508468 A 3