(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211143614.6 (22)申请日 2022.09.20 (71)申请人 广州白云山潘高寿药业股份有限公 司 地址 511490 广东省广州市番禺区东环街 天保路11号 (72)发明人 陈明　詹家辉　黎柳冰　卢其福　 陈世斌　周立　 (74)专利代理 机构 北京精金石知识产权代理有 限公司 1 1470 专利代理师 张天琦 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/74(2006.01) (54)发明名称 一种检测黄芪桂枝五物汤物质基准中六种 成分含量的方法 (57)摘要 本发明公开了一种检测黄芪桂枝五物汤物 质基准中六种成分含量的方法， 属于药物分析领 域。 所述方法包括以下步骤： 供试品溶液的制备、 混合对照品溶液的制备、 阳性样品溶液的制备、 HPLC检测； 所述六种成分为芍药内酯苷、 芍 药苷、 毛蕊异黄酮葡萄糖苷、 芒柄花苷、 肉桂酸和6 ‑姜 辣素， 以上六种成分涵盖了黄芪桂枝五物汤处方 中五味药材的其中四 味， 能够更加全面表征黄芪 桂枝五物汤物质基准的质量； HPLC检测中采用 HPLC波长切换法同时测定黄芪桂枝五物汤物质 基准中六种有效成分的含量， 其操作简便、 结果 可靠、 精密度高、 专属性强， 适用于经 典名方黄芪 桂枝五物汤复方制剂研发的质量控制。 权利要求书1页 说明书9页 附图6页 CN 115480011 A 2022.12.16 CN 115480011 A 1.一种检测黄芪桂枝五物汤物质基准中六种成分含量的方法， 其特征在于， 包括以下 步骤： 供试品溶液的制备、 混合对照品溶液的制备、 阳性样品溶液的制备、 HPLC检测； 所述六 种成分为芍药内酯苷、 芍药苷、 毛蕊异黄酮葡萄糖苷、 芒柄花苷、 肉桂酸和6 ‑姜辣素。 2.根据权利要求1所述的方法， 其特 征在于， 所述供 试品溶液的制备包括以下步骤： (1)取黄芪、 桂枝、 白芍、 生 姜、 大枣煎煮； (2)将步骤(1)中得到的煎煮液过滤， 滤液浓缩、 冻干， 即得黄芪桂枝五物汤物质基准样 品； (3)取步骤(2)中得到的样品， 加入甲醇， 称重、 超声、 补重、 过滤， 取续滤液， 即得供试品 溶液。 3.根据权利要求2所述的方法， 其特征在于， 步骤(1)中所述黄芪、 桂枝、 白芍、 生姜、 大 枣的重量比为8 ‑9： 8‑9： 8‑9： 16‑17： 6‑8。 4.根据权利要求2所述的方法， 其特征在于， 步骤(1)中所述煎煮包括以下步骤： 加水 1100‑1300mL， 煮至出 液350‑450mL。 5.根据权利 要求2所述的方法， 其特征在于， 步骤(3)中所述样品、 甲醇的用量比为0.5 ‑ 1.5g： 20‑30mL。 6.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述HPLC检测中流动相为乙腈和甲酸溶 液， 所述甲酸溶 液中甲酸的体积分数为0.1％ ‑0.3％。 7.根据权利 要求6所述的方法， 其特征在于， 所述HPLC检测的梯度洗脱程序 为： 0‑7min， 5％→12％乙腈； 7 ‑20min， 12％ →19％乙腈； 20‑30min， 19％ →30％乙腈； 30 ‑45min， 30％ → 70％乙腈； 45 ‑50min， 70％乙腈。 8.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述HPLC检测中流速为0.5 ‑1.5mL·min‑1， 柱温为20 ‑30℃， 进样量 为15‑25 μL， 检测波长为25 0‑280nm。 9.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述混合对照品溶液的制备包括以下步 骤： 取芍药内酯苷、 芍药苷、 毛蕊异黄酮葡萄糖苷、 芒柄花苷、 肉桂酸和 6‑姜辣素对照品， 加 入甲醇溶解， 即得混合对照品溶 液。 10.根据权利要求9所述的方法， 其特征在于， 所述混合对照品溶液中芍药内酯苷、 芍药 苷、 毛蕊异黄酮葡萄糖苷、 芒柄花苷、 肉桂酸和6 ‑姜辣素的重量比为1.1 ‑1.2： 6.0 ‑6.1： 0.07‑0.08： 0.02 ‑0.03： 0.10‑0.11： 0.2‑0.3。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115480011 A 2一种检测黄芪桂枝五物汤物质基准中六种成分含量的方 法 技术领域 [0001]本发明属于药物分析领域， 涉及一种检测黄芪 桂枝五物汤物质基准中六种成分含 量的方法。 背景技术 [0002]黄芪桂枝五物汤由黄芪、 桂枝、 芍药、 生姜、 大枣五味中药材制成， 主要用于治疗以 肢体麻木， 自汗浮肿为特征的疾病。 适用于肌肉疏松， 虚胖， 皮肤缺乏弹性， 腹部松软， 下肢 多有浮肿的患者， 一般会伴有乏力， 头 晕， 胸闷， 气短， 心悸等症状。 [0003]经典名方的物质基准是经典名方复方制剂的研究与开发中的关键环节， 承接了经 典名方的古法制备工艺和现代制剂工艺， 含量测定是控制物质基准质量的主要方法。 目前 没有针对黄芪桂枝五物汤物质基准进 行多成分含量测定的报道或专利， 大多 是黄芪桂枝五 物汤汤剂或颗粒的多成分含量测定 。 [0004]文献(HPLC法同时测定黄芪桂枝五物汤中6种有效成分的含量[J].沈阳药科大学 学报,2022,39(7):791 ‑797)报道了黄芪桂枝五物汤汤剂同时测定六种成分含量的方法， 以 上六种成分具体是黄芪、 桂枝、 白芍中所含的芍药苷、 毛 蕊异黄酮葡萄糖苷、 芒柄花苷、 毛 蕊 异黄酮、 肉桂酸和刺芒柄花素。 [0005]中国专利CN  109521106  A公开了一种同时检测黄芪桂枝五物颗粒中四种成分含 量的方法， 所述四种成分为芍药苷、 毛蕊异黄酮葡萄糖苷、 桂皮醛、 6 ‑姜辣素， 该方法包括将 待测样品用提取溶剂 30～80％甲醇提取， 提取液过滤后直接上高效液相色谱仪进 行检测的 步骤。 以上专利能同时检测出黄芪桂枝五物颗粒中四种物质的含量， 但同时测定的指标成 分较少， 难以全面表征黄芪桂枝五物颗粒物质基准的质量。 [0006]因此， 有必要探索一种重复性、 稳定性、 精密度 高， 专属性强的检测黄芪桂枝五物 汤物质基准中各成分含量的方法。 发明内容 [0007]本发明针对现有技术存在的问题， 提供了一种重复性、 稳定性、 精密度高、 专属性 强的可同时检测黄芪桂枝五物汤物质基准中六种成分含量的方法。 [0008]为实现上述目的， 本发明采用的技 术方案如下： [0009]提供了一种检测黄芪桂枝五物汤物质基准中六种成分含量的方法， 包括以下步 骤： 供试品溶液的制备、 混合对照品溶液的制备、 阳性样品溶液的制备、 HPLC检测； 所述六种 成分为芍药内酯苷、 芍药苷、 毛蕊异黄酮葡萄糖苷、 芒柄花苷、 肉桂酸和6 ‑姜辣素。 [0010]进一步地， 所述供 试品溶液的制备包括以下步骤： [0011](1)取黄芪、 桂枝、 白芍、 生 姜、 大枣煎煮； [0012](2)将步骤(1)中得到的煎煮 液过滤， 滤液浓缩、 冻干， 即得黄芪桂枝五物汤物质基 准样品； [0013](3)取步骤(2)中得到的样品， 加入甲醇， 称重、 超声、 补 重、 过滤， 取续滤液， 即得供说　明　书 1/9 页 3 CN 115480011 A 3