(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202211243676.4 (22)申请日 2022.10.12 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 115327000 A (43)申请公布日 2022.11.11 (73)专利权人 深圳市海 滨制药有限公司 地址 518000 广东省深圳市 盐田区沙 头角 深盐路2003号 (72)发明人 梁立睿　王涛　叶飞　颜晓丽　 欧军　林楠棋　孙万鹏　 (74)专利代理 机构 北京集佳知识产权代理有限 公司 11227 专利代理师 任文生 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/34(2006.01) G01N 30/36(2006.01) G01N 30/74(2006.01)(56)对比文件 CN 113929660 A,2022.01.14 CN 103896802 A,2014.07.02 US 6054557 A,2000.04.25 CN 106918672 A,2017.07.04 KR 20080085245 A,20 08.09.24 J. Pietsc h et al.Determi nation of aliphatic and al icyclic amines in water by gas and l iquid chromatography after derivatizati on by chloroformates. 《Fresen ius J Anal C hem》 .1996,第355卷 Fuqiang Zhu et al.Identi fication, synthesis, and co ntrol of efi naconazole impurities. 《Pharmazie》 .2018,第73卷 谢文林等.穿膜肽修饰胸腺五肽类似物的合 成和生物活性研究. 《华中师 范大学学报(自然科 学版)》 .20 08,第42卷(第02期),242-246. 任仲辉等.胸腺五肽合成工艺的研究. 《黑龙 江医药》 .20 08,(第005期),67- 68. 审查员 肖锡峰 (54)发明名称 一种检测艾氟康唑中4-亚甲基哌啶的方法 (57)摘要 本申请属于色谱分析技术领域， 尤其涉及一 种检测艾氟康唑中4 ‑亚甲基哌啶的方法。 本申请 提供了检测艾氟康唑中4 ‑亚甲基哌啶的方法， 包 括： 在缓冲溶液条件下， 将艾氟康唑样品与FMOC ‑ Cl乙腈溶液发生衍生化反应， 然后加入稀释剂， 得到艾氟康唑衍生化产物溶液； 将艾氟康唑衍生 化产物溶液和4 ‑亚甲基哌啶溶液采用高效液相 色谱进行检测， 得到艾氟康唑样品中4 ‑亚甲基哌 啶的定性定量检测结果； 采用梯度洗脱的方式使 流动相通过色谱柱， 然后进行紫外检测。 本申请 提供了一种检测艾氟康唑中4 ‑亚甲基哌啶的方 法， 能够同时准确检测出艾氟康唑中4 ‑亚甲基哌 啶杂质。 权利要求书1页 说明书8页 附图3页 CN 115327000 B 2022.12.27 CN 115327000 B 1.一种检测艾氟康唑中4 ‑亚甲基哌啶的方法， 其特 征在于， 包括： 在缓冲溶液条件下， 将艾氟康唑样品与FMOC ‑Cl乙腈溶液发生衍生化反应， 然后加入稀 释剂， 得到衍 生化产物溶 液； 将所述衍生化产物溶液采用高效液相色谱进行检测， 得到艾氟康唑样品中4 ‑亚甲基哌 啶的定性定量检测结果； 所述高效液相色谱的条件为： 十八烷基为填充剂的色谱柱； 以甲酸水溶液为流动相A， 以乙腈为流动相B； 洗脱的方法为： 采用梯度洗脱的方式使流动相通过色谱柱， 然后进行紫 外检测； 在0~5min， 所述流动相A和所述流动相 B进行等度洗脱， 所述流动相A在流动相中的质量 含量为45%， 所述 流动相B在流动相中的质量含量 为55%； 在5~6min， 所述流动相A在流动相中的质量含量从45%下降到25%， 所述流动相B在流动 相中的质量含量从5 5%增加到75%； 在6~15min， 所述流动相A和所述流动相B进行等度洗脱， 所述流动相A在流动相中的质 量含量为25%， 所述 流动相B在流动相中的质量含量 为75%。 2.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述缓冲溶液选自硼砂缓冲盐、 磷酸缓冲 盐和吡啶中的一种或多种。 3.根据权利要求2所述的方法， 其特征在于， 所述缓冲溶液为硼砂缓冲盐或磷酸缓冲 盐， 采用调节溶 液调节所述缓冲溶 液的pH至8~12。 4.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述FMOC ‑Cl乙腈溶液的芴甲氧羰酰氯浓 度为2~8 mg/mL。 5.根据权利要求4所述的方法， 其特征在于， 所述FMOC ‑Cl乙腈溶液的芴甲氧羰酰氯浓 度为5 mg/mL。 6.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述稀释剂为乙腈 ‑水溶液， 所述乙腈与所 述水的体积比为10 0： 0~50： 50。 7.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述高效液相色谱检测过程中的流动相流 速为0.8~1.2mL/mi n； 所述色谱柱的柱温为20~40℃。 8.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述高效液相色谱检测过程中的检测波长 为200~300nm。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115327000 B 2一种检测艾氟康唑中4 ‑亚甲基哌啶的方 法 技术领域 [0001]本申请属于色谱分析技术领域， 尤其涉及一种检测艾氟康唑中4 ‑亚甲基哌啶的方 法。 背景技术 [0002]艾氟康唑是2014年FDA批准的新型三 唑类外用药物， 其作用机制是抑制真菌14a ‑ 去甲基化 酶， 从而影响细胞膜的完整性和功能。 4 ‑亚甲基哌啶是生产艾氟康唑起始物料， 为 艾氟康唑的侧链结构， 易于在艾氟康唑中残留。 4 ‑亚甲基哌啶的极性较大， 使用常规反相色 谱体系难于保留， 目前其检测多为在流动相中加入强离子对试剂方法进行检测； 且4 ‑亚甲 基哌啶在液相色谱中紫外吸 收较弱， 方法的灵敏度不足。 发明内容 [0003]鉴于此， 本申请提供了一种检测艾氟康唑中4 ‑亚甲基哌啶的方法， 能够同时准确 检测出艾氟康唑中4 ‑亚甲基哌啶杂质。 [0004]本申请第一方面 提供了检测艾氟康唑中4 ‑亚甲基哌啶的方法， 包括： [0005]在缓冲溶液条件下， 将艾氟康唑样品与芴甲氧羰酰氯FMOC ‑Cl乙腈溶液发生衍生 化反应， 然后加入 稀释剂， 得到衍 生化产物溶 液； [0006]将所述衍生化产物溶液采用高效液相色谱进行检测， 得到艾氟康唑样品中4 ‑亚甲 基哌啶的定性定量检测结果； [0007]所述高效液相色谱的条件为： 十八烷基为填充剂的色谱柱； 以甲酸水溶液为流动 相A， 以乙腈为流动相B； 所述洗脱的方法为： 采用梯度洗脱的方式使流动相通过色谱柱， 然 后进行紫外检测； [0008]在0~5min， 所述流动相A和所述流动相B进行等度洗脱， 所述流动相A在流动相中的 质量含量 为35%~55%， 所述流动相B在流动相中的质量含量 为45%~65%； [0009]在5~6min， 所述流动相A在流动相中的质量含量从35% ‑55%下降到15%~35%， 所述流 动相B在流动相中的质量含量从45%~65%增加到65%~85%； [0010]在6~15min， 所述流动相A和所述流动相B进行等度洗脱， 所述流动相A在流动相中 的质量含量 为15%~35%， 所述流动相B在流动相中的质量含量 为65%~85%。 [0011]具体的， 采用高效液相色谱进行检测时， 分别检测艾氟康唑样品衍生化产物溶液 和4‑亚甲基哌啶对照溶液衍生化产物溶液， 即对照品与供试品的衍生产物， 以计算得到艾 氟康唑样品中4 ‑亚甲基哌啶的定性定量检测结果。 [0012]具体的， 所述艾氟康唑样品中4 ‑亚甲基哌啶具有式1的结构， 式1如下 所示： [0013]   式1。 [0014]具体的， 所述色谱柱为3.5 μm的C18键合硅胶颗粒为 填充剂的色谱柱。 [0015]另一实施例中， 所述缓冲溶液选自硼砂缓冲盐、 磷酸缓冲盐和吡啶中的一种 或多说　明　书 1/8 页 3 CN 115327000 B 3