(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211174049.X (22)申请日 2022.09.26 (71)申请人 北京金域医学检验实验室有限公司 地址 100020 北京市朝阳区京顺 东街6号院 26号楼1层101、 2层201、 3层301、 4层 401 (72)发明人 胡滨　陈宝荣　李廷华　于蕾　 张利杰　夏苗苗　彭宝生　候生根　 (74)专利代理 机构 北京品源专利代理有限公司 11332 专利代理师 陈小龙 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/08(2006.01)G01N 30/34(2006.01) G01N 30/72(2006.01) G01N 30/86(2006.01) (54)发明名称 一种尿液中游离醛固酮的检测方法 (57)摘要 本发明提供一种尿液中游离醛固酮的检测 方法。 所述检测方法包括以下步骤： (1)通过液固 联合萃取对尿液样本进行前处理； (2)通过超高 效液相串联质谱仪对步骤(1)处理后的尿 液样本 进行检测， 得到游离醛固酮的含量； 其中， 所述检 测中流动相A为体积百分含 量为0.05 ‑0.2％的甲 酸水溶液， 流动相B为乙腈。 本发明提供了一种尿 液中游离醛固酮的分离纯化及定量测量的方法， 可对尿液中游离醛固酮进行分离纯化和富集并 进行定量测量。 通过液固联合萃取法， 再通过高 效液相色谱串联质谱检测， 可使游离醛固酮的测 量更加准确， 精密度更高， 检测范围更广。 权利要求书2页 说明书9页 附图6页 CN 115541748 A 2022.12.30 CN 115541748 A 1.一种尿液中游离醛固酮的检测方法， 其特 征在于， 所述检测方法包括以下步骤： (1)将尿液样本、 硫酸锌甲醇溶液和磷酸水溶液混合后， 离心， 收集上清液； 将上清液加 入含阴离子交换填料 的固相萃取多孔板中， 使用磷酸水溶液、 含氨水 的甲醇水溶液和纯水 进行淋洗， 再使用甲醇水 溶液进行洗脱， 得到纯化后的尿液样本； (2)通过超高效液相串联质谱仪对步骤(1)处理后的尿液样本进行检测， 得到游离醛固 酮的含量； 其中， 所述检测中流动相A为体积百分含量为0.05 ‑0.2％的甲酸水溶液， 流动相B为乙 腈。 2.根据权利要求1所述的尿液中游离醛固酮的检测方法， 其特征在于， 步骤(1)中， 所述 硫酸锌甲醇溶液的浓度为0.05 ‑0.2mol/L； 所述尿液样 本和硫酸锌甲醇溶液的体积比为(1 ‑ 3):1。 3.根据权利要求1或2所述的尿液中游离醛固酮的检测方法， 其特征在于， 步骤(1)中， 所述离心前还 包括涡旋， 所述涡旋的时间为1 ‑5min； 优选地， 步骤(1)中， 所述离心的转速为70 00‑15000rpm， 所述离心的时间为3 ‑10min。 4.根据权利要求1 ‑3任一项所述的尿液中游离醛固酮的检测方法， 其特征在于， 所述阴 离子交换填料包括季铵基和/或叔胺基化学键合的聚苯乙烯/二乙烯基苯； 优选地， 步骤(1)中， 所述含阴离 子交换填料的固相萃取多孔板包括Oasis  MAX SPE板。 5.根据权利要求1 ‑4任一项所述的尿液中游离醛固酮的检测方法， 其特征在于， 步骤 (1)中， 所述淋洗具体包括以下步骤： 依次使用0.01 ‑0.1vol％的磷酸水溶液、 含0.05 ‑ 0.2wt％氨水的5 ‑15vol％甲醇水 溶液和纯水进行淋洗； 优选地， 步骤(1)中， 所述磷酸水溶液、 含氨水的甲醇水溶液和纯水的体积比为(1 ‑2): (1‑2):(1‑2)。 6.根据权利要求1 ‑5任一项所述的尿液中游离醛固酮的检测方法， 其特征在于， 所述洗 脱具体包括以下步骤： 使用体积百分含量 为60‑80％的甲醇水溶液进行洗脱至纯 水中； 优选地， 所述甲醇水 溶液和纯水的体积比为(1 ‑1.5):1。 7.根据权利要求1 ‑6任一项所述的尿液中游离醛固酮的检测方法， 其特征在于， 步骤 (2)中， 所述检测采用梯度洗脱， 所述梯度洗脱的程序如下 所示： 在0‑0.2min内， 流动相A的体积占比恒定为75 ‑85％， 流动相B的体积占比恒定为25 ‑ 15％； 后匀速变化至第1.7min， 流动相A的体积占比为45 ‑55％， 流动相B的体积占比为55 ‑ 45％； 后匀速变化至第2.0min， 在第2.0 ‑2.5min内， 流动相A的体积占比恒定为5 ‑15％， 流动 相B的体积占比恒定为95 ‑85％； 后匀速变化至第3.0min， 流动相A的体积占比为75 ‑85％， 流 动相B的体积占比为25 ‑15％； 优选地， 所述梯度洗脱的流速为0.3 ‑0.5mL/mi n， 所述梯度洗脱的进样体积为5 ‑15 μL。 8.根据权利要求1 ‑7任一项所述的尿液中游离醛固酮的检测方法， 其特征在于， 步骤 (2)中， 所述检测采用的色谱柱为A CQUITY UPLC BEH C8， 色谱柱的长度为50 ‑100mm， 内径为 1.5‑2.5mm， 填充物粒径为1 ‑2 μm； 优选地， 步骤(2)中， 所述检测的柱温为 40‑50℃； 优选地， 步骤(2)中， 所述检测采用的内标物为醛固酮的C13标记物或氘代标记物， 所述 醛固酮的氘代标记 物为d4‑醛固酮和/或d7 ‑醛固酮。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115541748 A 29.根据权利要求1 ‑8任一项所述的尿液中游离醛固酮的检测方法， 其特征在于， 步骤 (2)中， 所述检测的线性范围为10 ‑10000pg/mL， 所述线性回归系数在0.9 99以上。 10.根据权利要求1 ‑9任一项所述的尿液中游离醛固酮的检测方法， 其特征在于， 步骤 (2)中， 所述检测中采用电喷雾电离 ESI源； 优选地， 步骤(2)中， 所述检测中毛细管电压为2 ‑4kV， 锥孔电压为20 ‑50V； 优选地， 步骤(2)中， 所述检测中脱溶剂气流速为800 ‑1200L/Hr， 进样锥气体流速为 130‑170L/Hr， 喷雾气压力为5 ‑9bar。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115541748 A 3