(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211153382.2 (22)申请日 2022.09.20 (71)申请人 贵州医科 大学 地址 550025 贵州省贵阳市花溪区花溪大 学城栋青路2号 (72)发明人 黄勇　郑林　迟明艳　周祖英　 晏婷　巩仔鹏　李月婷　金阳　 (74)专利代理 机构 北京中睿智恒知识产权代理 事务所(普通 合伙) 16025 专利代理师 邓大为 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/04(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/72(2006.01)G01N 30/86(2006.01) G01N 30/88(2006.01) (54)发明名称 一种大果木姜子油的入血成分以及成分分 布测定方法 (57)摘要 本发明公开了一种大果木姜子油的入血成 分以及成分分布测定方法， 属于中药技术领域， 一种大果木姜子油的入血成分， 所述入血成分包 括桉油精、 对伞花烃、 4 ‑萜烯醇、 4 ‑异丙基环己 ‑ 2‑烯‑1‑酮、 α‑松油醇、 2 ‑(4‑甲基苯基)丙‑2醇； 一种大果木姜子油的入血成分分布测定方法， 用 于测定所述的大果木姜子油的入 血成分分布， 包 括以下步骤： S1、 溶液配制、 S2、 药液配制、 S3、 组 织样品的收集、 S4、 组织样品的处理、 S5、 获得标 准曲线、 S6、 组织匀浆样品测定； 它可以表明大果 木姜子油的入 血成分， 以及在大鼠体内各组织分 布情况， 阐明大果木姜子油中成分在大鼠体内的 动力学特征及组织暴露程度， 为大果木姜子油的 深层次开发利用提供 药效物质基础。 权利要求书2页 说明书14页 附图3页 CN 115372520 A 2022.11.22 CN 115372520 A 1.一种大果木姜子油的入血成分， 其特征在于， 所述入血成分包括桉油精、 对伞花烃、 4‑萜烯醇、 4‑异丙基环己 ‑2‑烯‑1‑酮、 α‑松油醇、 2 ‑(4‑甲基苯基)丙 ‑2醇。 2.一种大果木姜子油的入血成分分布测定方法， 其特征在于， 用于测定权利要求1所述 的大果木姜子油的入血成分 分布， 包括以下步骤： S1、 溶液配制 1)标准品溶液的配制： 精密称取桉油精、 对伞花烃、 4 ‑萜烯醇、 4 ‑异丙基环己 ‑2‑烯‑1‑ 酮、 α‑松油醇、 2 ‑(4‑甲基苯基)丙 ‑2醇对照品适量， 置于容量瓶中， 加乙酸乙酯溶解并稀释 至刻度， 制成含桉油精、 对伞花烃、 4 ‑萜烯醇、 4 ‑异丙基环己 ‑2‑烯‑1‑酮、 α‑松油醇、 2 ‑(4‑甲 基苯基)丙 ‑2醇的混合对照品溶 液， 保存备用； 2)内标溶液的配制： 精密称取环己酮对照品， 置于容量瓶中， 加入少量乙酸乙酯超声溶 解并定容， 获得环己酮的内标储备液； 取环己酮内标储备液适量， 逐步稀释配制成内标溶 液， 保存备用； S2、 药液配制： 称取大果木姜子油适量， 置于烧杯中， 加入0.4 ‑0.6％吐温 ‑80生理盐水 溶液， 超声8 ‑12min溶解， 即得 药液， 且现配现用； S3、 组织样品的收集： 1)选取SD雄性大鼠若干只， 并平均分组， 给药前12h禁食， 自由饮水， 大鼠口服步骤S2中 的药液后， 分别于给药后进行股动脉放血， 之后迅速取出心、 肝、 脾、 肺、 肾、 脑、 胃、 肠、 皮肤、 肌肉； 2)用冰生理盐水将组织表面的血迹以及内容物洗去， 并用滤纸将其沾干， 装入自封袋 中形成组织样品， 保存备用； S4、 组织样品的处理： 将步骤S3中的组织样品用生理盐水以1:2(g:mL)的比例匀浆， 然 后7000‑9000r·min‑1离心8‑15min， 取大鼠研磨组织上清液100 μL， 置1.5mL离心管中， 依次 加入步骤S1 ‑2中的内标溶液100μL， 涡混2 ‑5min， 再加入乙酸 乙酯200μL， 涡混2 ‑5min， 4‑6 ℃、 10000‑13000r·min‑1离心10‑15min， 得到组织匀浆样品， 保存备用； S5、 获得标准曲线： 取100 μL大鼠空白肝组织匀浆液， 加入含有6种成分的步骤S1 ‑1中的 混合对照品溶液100 μL， 配制成相当于大鼠的组织匀浆样品的药物浓度； 按步骤S4项下组织 样品的处理方法操作， 以待测成分与环己酮内标峰面积之比(A/A i)为纵坐标Y， 各成分的浓 度(C)为横坐标 X进行线性回归， 计算的直线方程， 即为标准曲线； S6、 组织匀浆样品测定： 将步骤S4中的组织匀浆样品通过GC ‑MS SIM法进样测定， 记录 所有样品的指标成分和环己酮内标的峰面积， 将其带入到随行步骤S 5中的标准曲线中计算 出各待测成分的浓度。 3.根据权利要求2所述的大果木姜子油的入血成分分布测定方法， 其特征在于， 步骤 S1‑1中的对照品置于10mL的容量瓶中， 且混合对照品溶液在 ‑15‑25℃下保存备用， 步骤S1 ‑ 2的容量瓶同样为10mL， 且保存温度同样为 ‑15‑25℃。 4.根据权利要求2所述的大果木姜子油的入血成分分布测定方法， 其特征在于， 步骤 S1‑2中的内标 溶液浓度为20 0‑250ng·mL‑1。 5.根据权利要求2所述的大果木姜子油的入血成分分布测定方法， 其特征在于， 步骤 S3‑1中股动脉放血时间点 为四个， 分别是 给药后0.167h、 0.5 h、 1h和1.5 h。 6.根据权利要求2所述的大果木姜子油的入血成分分布测定方法， 其特征在于， 步骤权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115372520 A 2S3‑2中组织样品的保存温度为 ‑15‑25℃。 7.根据权利要求2所述的大果木姜子油的入血成分分布测定方法， 其特征在于， 步骤 S3‑1中的给药剂量为0.365‑0.385g/d。 8.根据权利要求2所述的大果木姜子油的入血成分分布测定方法， 其特征在于， 步骤S4 的组织匀浆样品保存于盛 有内插管的进样瓶内， 且保存温度为 ‑15‑25℃。 9.根据权利要求2所述的大果木姜子油的入血成分分布测定方法， 其特征在于， 步骤S6 中GC‑MS SIM法的色谱条件为 不分流进样。 10.根据权利要求2所述的大果木姜子油的入血成分分布测定方法， 其特征在于， 步骤 S6中GC‑MS SIM法中质谱条件的检测电压为0.25 ‑0.3KV。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115372520 A 3