(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211144363.3 (22)申请日 2022.09.20 (71)申请人 江西普正制药股份有限公司 地址 343100 江西省吉安市井冈山经济技 术开发区创新大道 278号 (72)发明人 周朝忠　李晶　张光磊　王翠　 康兴东　旷春兰　陈梁　吴志平　 毛金娣　 (74)专利代理 机构 北京精金石知识产权代理有 限公司 1 1470 专利代理师 陈伟 (51)Int.Cl. G01N 30/86(2006.01) G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) (54)发明名称 一种厚朴温中汤汤剂及基准样品特征图谱 的建立及含量测定方法 (57)摘要 本发明涉及中药分析领域， 特别涉及一种厚 朴温中汤汤剂及基准样品特征图谱及含量测定 方法的建立。 特征图谱建立方法步骤包括供试品 溶液的制备、 将供试品溶液注入高效液相色谱、 记录色谱图、 方法学考察。 另建立了厚朴酚、 和厚 朴酚、 橙皮苷和山姜素4个指标成分的含量测定 方法， 并进行了精密度、 重复性、 稳定性、 专属性、 线性关系、 加样回收率和耐用性考察， 得出该方 法的方法学考察结果较好， 耐受性较高， 适用于 厚朴温中汤指标成分的含量测定。 通过建立指标 成分含量测定方法和特征图谱含量测定方法为 厚朴温中汤 汤剂基准样品的质量控制提供依据。 权利要求书2页 说明书14页 附图3页 CN 115508491 A 2022.12.23 CN 115508491 A 1.一种厚朴温中汤 汤剂及基准样品特 征图谱的建立方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： (a)供试品的制备： 取固相萃取小柱， 活化后， 取厚朴温中汤汤剂及基准样品上样后用 甲醇溶液淋洗和洗脱， 收集洗脱液， 得厚朴温中汤供 试品溶液； (b)对照品的制备： 精密称取厚朴酚、 和厚朴酚、 橙皮苷、 甘草苷、 甘草酸铵、 山姜素、 乔 松素、 小豆蔻明、 桤木酮、 去氢木香内酯、 木香烃内酯、 6 ‑姜辣素， 分别加甲醇制成对照品溶 液； (c)色谱条件： 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂， 以乙腈为流动相A， 以0.1％磷酸水 溶液为流动相B， 进行梯度洗脱， 其中梯度洗脱程序为： 0～65min， 流动相A为11％～57％， 流 动相B为89％～43％； 65～72min， 流动相A为57％～66％， 流动相B为43％～34％； 72～ 75min， 流动相A为62％～85％， 流动相B为38％～15％； 75～82min， 流动相A为85％～90％， 流动相B为15％～10％， 流速 0.8～1.2mL ·min‑1， 检测波长210～ 290nm， 柱温20～40℃； (d)分别取混合对照品和供 试品溶液5～20 μL， 注入高效液相色谱仪， 记录色谱图。 2.根据权利要求书1所述的特征图谱的建立方法， 其特征在于， 取厚朴温中汤汤剂及基 准样品提取液， 趁热过滤， 得到的滤液趁热离心10min， 取上清液备用； 取C18 ‑U固相萃取小 柱， 用甲醇5mL活化， 水5mL平衡， 平衡后， 精密量取离心上清液5mL上样， 加10％甲醇5mL淋 洗， 再加纯甲醇5mL洗脱， 收集洗脱液， 得厚朴温中汤供 试品溶液。 3.根据权利要求1所述的特征图谱的建立方法， 其特征在于， 混合对照品的制备方法如 下： 精密称取毛厚朴酚、 和厚朴酚、 橙皮苷、 甘 草苷、 甘草酸铵、 山姜素、 乔松素、 小豆 蔻明、 桤 木酮、 去氢木 香内酯、 木 香烃内酯、 6 ‑姜辣素适量， 分别加甲醇制成8～55mg ·L‑1的混合对照 品溶液。 4.根据权利要求1所述的特征图谱的建立方法， 其特征在于， 厚朴温中汤汤剂及基准样 品特征图谱测定的色谱条件为： 采用Diamo nsil C18色谱柱， 4.6m m×150mm， 5 μm。 5.根据权利要求1所述的特征图谱的建立方法， 其特征在于， 测定方法具体操作过程 为： 分别精密吸取对照品和供试品溶液10 μL， 注入高效液相色谱仪， 测 定， 记录色谱图的时 间为82mi n。 6.根据权利要求1所述的特征图谱的建立方法， 其特征在于， 通过混标和厚朴温中汤全 方的图谱， 共指认12个色谱峰， 其中第8、 11号峰分别为和厚朴酚与 厚朴酚； 第2号峰为橙皮 苷； 第1、 4号 峰分别为甘草苷和甘草酸； 第3、 6、 7、 12号 峰分别为山姜素、 乔松素、 小豆蔻明、 桤木酮； 第9、 10号峰分别为木香烃内酯与去氢木香内酯； 第5号峰为6 ‑姜辣素。 7.一种厚朴温中汤 汤剂及基准样品含量测定方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： (a)供试品溶液的制备： 取固相萃取小柱， 用甲醇活化后用水平衡， 平衡后， 取厚朴温中 汤汤剂及基准样品上样后用甲醇溶 液淋洗和洗脱， 收集洗脱液， 得厚朴温中汤供 试品溶液； (b)混合对照品溶液的制备： 分别精密称定和厚朴酚、 山姜素、 厚朴酚、 橙皮苷， 加甲醇 制成对照品溶 液； (c)色谱条件： 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂， 以乙腈为流动相A， 以水为流动相B， 进行梯度洗脱， 其中梯度洗脱程序为： 0～20min， 流动相A为20％～25％， 流动相B为80％～ 75％； 20～25min， 流动相A为25％～40％， 流动相B为75％～60％； 25～36min， 流动相A为 40％， 流动相B为60％； 36～37min， 流动相A为40％～50％， 流动相B为60％～50％； 37～ 55min， 流动相A为50％～60％， 流动相B为50％～40％； 55～60min， 流动相A为60％～65％，权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115508491 A 2流动相B为40％～35％； 60～ 65min， 流动相A为65％～100％， 流动相B为35％～0％， 流速0.8 ～1.2mL·min‑1， 检测波长210～ 290nm， 柱温20～40℃； (d)分别取混合对照品和供试品溶液5～20μL注入高效液相色谱仪， 记录色谱图， 在该 色谱条件下， 4个成分的R均大于1.5， 达 到基线分离， 理论塔板数均不低于 5000。 8.根据权利要求7所述的厚朴温中汤汤剂及基准样品含量测定方法， 其特征在于， 步骤 (a)中使用的是C18 ‑U固相萃取小柱， 采用5mL上清液上样， 加10％甲醇5mL淋洗， 再加纯甲醇 5mL洗脱， 收集洗脱液， 得厚朴温中汤供 试品溶液。 9.根据权利要求7所述的厚朴温中汤汤剂及基准样品含量测定方法， 其特征在于， 步骤 (b)中混合对照品中得和厚朴酚、 山姜素、 厚朴酚、 橙皮苷的浓度分别为41.867μg/mL、 42.333 μg/mL、 20.93 μg/mL、 0.40mg/mL的混合对照品溶 液。 10.根据权利要求7所述的厚朴温中汤汤剂及基准样品含量测定方法， 其特征在于， 步 骤(c)中的色谱条件： 流动相A为乙腈， 流动相B为水； Diamonsil  C18色谱柱， 柱温25℃， 流速 1.0mL/mi n， 检测波长280nm。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115508491 A 3