(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211157441.3 (22)申请日 2022.09.22 (71)申请人 谱天 （天津） 生物科技有限公司 地址 300308 天津市滨 海新区空港经济区 西七道26号 (72)发明人 李臻　宋雷　陈亮宇　赵娜　李捷　 (74)专利代理 机构 南京中律知识产权代理事务 所(普通合伙) 32341 专利代理师 沈振涛 (51)Int.Cl. G01N 33/68(2006.01) G01N 33/543(2006.01) G01N 30/72(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/02(2006.01) (54)发明名称 一种全血蛋白质组学分析方法 (57)摘要 本发明公开了一种全血蛋白质组学分析方 法， 包括以下步骤： S1、 向全血样本中加入结合缓 冲液和磁珠， 混合孵育后， 经过磁分离收集磁珠； S2、 向步骤S1所得磁珠中， 加入清洗缓冲液， 重 悬 清洗后， 经过磁分离收集磁珠， 重复该步骤数次； S3、 将步骤S2所得磁珠制备成蛋白质组样品， 进 行质谱检测。 本发明方法应用于全血蛋白组分 析， 可以简化样本前处理步骤， 避免离心分离血 浆过程中造成的蛋白损失， 对于不能及时处理或 不具备离心条件的全血样本也可直接冷冻保存 后再检测。 权利要求书1页 说明书5页 附图2页 CN 115541888 A 2022.12.30 CN 115541888 A 1.一种全血蛋白质组学分析 方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： S1、 向全血样本中加入结合缓冲液和磁珠， 混合孵 育后， 经过磁分离收集磁珠； S2、 向步骤S1所得磁珠中， 加入清洗缓冲液， 重悬清洗后， 经过磁分离收集磁珠， 重复该 步骤数次； S3、 将步骤S2所 得磁珠制备成蛋白质组样品， 进行质谱检测。 2.根据权利要求1所述的全血蛋白质组学分析方法， 其特征在于， 步骤S1中， 所述全血 样本为新鲜采集、 部分溶 血或冷冻保存的抗凝全血样本 。 3.根据权利要求1所述的全血蛋白质组学分析方法， 其特征在于， 步骤S1中， 所述结合 缓冲液成分包括Tris、 磷酸二氢钾、 磷酸氢二钾、 磷酸钾、 磷酸、 磷酸二氢钠、 磷酸氢二钠、 磷 酸钠、 氯化钾、 氯化钠、 柠檬酸、 柠檬酸钠、 巴比妥酸、 巴比妥钠、 甲酸、 乙酸、 碳酸氢铵、 氯化 钙、 乙腈、 氢 氧化钠、 盐酸、 EDTA、 S DS、 NP‑40、 CHAPS、 吐温、 Trito n、 PEG中的一种或任意组合。 4.根据权利要求1所述的全血蛋白质组学分析方法， 其特征在于， 步骤S1中， 所述磁珠 为具有磁性的材料， 包括纳米四氧化三铁， 或与聚苯乙烯、 分子筛、 二氧化硅中的一种或几 种的复合物。 5.根据权利要求1所述的全血蛋白质组学分析方法， 其特征在于， 步骤S1中， 所述混合 孵育条件为： 孵 育温度为 4～37℃， 孵 育时间为1～120分钟， 震荡速度为0～10 00转/分钟。 6.根据权利要求1所述的全血蛋白质组学分析方法， 其特征在于， 步骤S2中， 所述清洗 缓冲液选自步骤S1所使用的结合 缓冲液或相应稀释液； 所述重悬清洗条件为为4～37℃， 震 荡速度为0～3 000转/分钟， 时间为1～3 0分钟。 7.根据权利要求1所述的全血蛋白质组学分析方法， 其特征在于， 步骤S3中， 所述蛋白 质组样品的制备 方法包括如下步骤： 向所述磁珠中加入还原试剂和烷基化试剂， 经还原烷基化反应后， 向体系中加入测序 级及以上的胰蛋白酶及消化 缓冲液， 进 行酶解反应； 酶解后样品经脱盐后， 得到蛋白质组样 品。 8.根据权利要求1所述的全血蛋白质组学分析方法， 其特征在于， 步骤S3中， 所述质谱 检测的方法包括： 采用液相色谱 ‑串联质谱法进行检测， 使用软件对获得数据进行抽提， 获 得蛋白及 肽段定性和定量数据。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115541888 A 2一种全血蛋白质组学分析方 法 技术领域 [0001]本发明属于蛋白质组学分析技术领域， 具体地， 涉及一种全血蛋白质组学分析方 法。 背景技术 [0002]血液中包含生物体各类 组织器官释放的物质， 潜藏着 大量可发掘的生理或病理信 息。 据推测， 血液中的蛋白质种类超过万种， 但是由于目前检测鉴定技术有限， 只有很小的 一部分蛋白质可被检测出来。 由于血液中含有数十种高丰度蛋白， 占了总蛋白量的95％以 上， 给血液蛋白组的检测带来了巨大的挑战。 目前， 即使通过使用商业化去高丰度抗体试剂 盒， 也仅能将蛋白鉴定数提高到40 0～800个。 [0003]血液样本采集后通常需要通过离心去除血细胞得到上层血浆后， 才能进行后续样 本制备和质谱检测， 否则检测过程中， 血细胞容易破裂释放出大量高丰度蛋白， 干扰检测结 果。 同时由于溶血原因， 如果不去除血细胞， 血液样本无法长期保存。 如果全血采样后未能 及时处理， 或不具备离心分离血浆条件， 通常无法继续用于蛋白组学分析。 在离心分离血浆 的过程中， 不可避免地会损失掉部分蛋白信息。 同时， 由于离心分离血浆过程的操作差异， 包括温度、 离心力、 离心 时间在内的各种因素， 均可能造成血浆蛋白组信息的人为差异， 对 血浆蛋白组分析和相关生理病理信息的挖掘产生干扰。 。 发明内容 [0004]发明目的： 针对现有技术存在的问题， 本发明提供了一种全血蛋白质组分析方法， 利用纳米材料富集方法， 选择性吸 附低丰度蛋白， 可以同时应用于新鲜采集或冷冻保存的 全血样本。 处理新鲜全血标本时， 可以保护血细胞防止其破裂， 从而 可以省略血浆分离步骤 而直接从全血样本中检测蛋白质组学信息， 其结果与血浆样本具有良好的定量相关性。 对 于不具备及时处理条件的全血样本， 冷冻保存后再用本发明方法进行样本处理， 也可以有 效去除样本中血浆和血细胞来源的高丰度蛋白， 选择性富集血液标本中的低丰度蛋白， 蛋 白组分析 结果具有较高的蛋白鉴定数及定量稳定性。 [0005]技术方案： 为达 到上述发明目的， 本发明采用如下技 术方案： [0006]一种全血蛋白质组学分析 方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： [0007]S1、 向全血样本中加入结合缓冲液和磁珠， 混合孵 育后， 经过磁分离收集磁珠； [0008]S2、 向步骤S1所得磁珠中， 加入清洗缓冲液， 重悬清洗后， 经过磁分离收集磁珠， 重 复该步骤数次； [0009]S3、 将步骤S2所 得磁珠制备成蛋白质组样品， 进行质谱检测。 [0010]步骤S1中， 所述全血样本选自不同物种、 部位来源的抗凝全血样本， 可以为新鲜采 集、 部分溶 血或或冷冻保存的抗凝全血样本， 优选冷冻保存的EDTA抗凝静脉全血。 [0011]所述结合缓冲液成分包括Tris、 磷酸二氢钾、 磷酸氢二钾、 磷酸钾、 磷酸、 磷酸二氢 钠、 磷酸氢二钠、 磷酸钠、 氯化钾、 氯化钠、 柠檬酸、 柠檬酸钠、 巴比妥酸、 巴比妥钠、 甲酸、 乙说　明　书 1/5 页 3 CN 115541888 A 3