(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211496145.6 (22)申请日 2022.11.28 (71)申请人 质谱生物科技有限公司 地址 264003 山东省烟台市莱山区澳 柯玛 大街18号 (72)发明人 王猛　孙茁凯　张继钢　王瑜　 张瑞雪　孙菁菁　靳海娇　刘霞　 初晨露　仲雪娇　卞晓磊　 (74)专利代理 机构 北京睿博行远知识产权代理 有限公司 1 1297 专利代理师 陈阳 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/08(2006.01)C08F 292/00(2006.01) C08F 230/06(2006.01) C08F 222/14(2006.01) C08J 9/26(2006.01) C08L 51/10(2006.01) (54)发明名称 一种儿茶酚胺类 激素的检测方法 (57)摘要 本发明涉及儿茶酚胺类分子印迹聚合物的 合成及应用技术领域， 且公开了一种儿茶酚胺类 激素的检测方法， 包括： 对样品进行前处理获得 真空浓缩样品； 使用包覆有儿茶酚胺类 分子印迹 聚合物壳层的磁性纳米微球对真空浓缩样品进 行特异性结合、 并进行富集和分离操作， 采用液 相色谱串联质谱分析； 所述磁性纳米微球方法 为： 利用表面分子印迹技术， 以磁性纳米微球为 基质材料、 儿茶酚胺类激素为模板分子、 含有烯 基和硼酸功能基团的功能单体Mc为功能单体， 功 能单体Mc与模板分子的邻位羟基通过硼亲和反 应共价结合制备得到包覆有儿茶酚胺类分子印 迹聚合物壳层的磁性纳米微球。 本发 明提高了儿 茶酚胺类激素检测的特异性、 灵敏度及检测通 量。 权利要求书1页 说明书8页 附图1页 CN 115524427 A 2022.12.27 CN 115524427 A 1.一种儿茶酚胺类激素的检测方法， 其特 征在于， 所述方法包括如下步骤： 步骤一， 对样品进行 前处理获得真空浓 缩样品； 步骤二， 首先使用包覆有儿茶酚胺类分子印迹聚合物壳层的四氧化三铁磁性纳米微球 对真空浓缩样品进行特异性结合、 并进行富集和分离操作， 然后采用液相色谱串联质谱分 析； 其中， 所述磁性纳米微球的制备方法为： 利用表面分子印迹技术， 以四氧化三铁磁性纳 米微球为基质材料、 儿茶酚胺类激素为模板分子、 含有烯基和硼酸功能基团的功能单体Mc 为功能单体， 功能单体Mc与模板 分子的邻位羟基通过硼亲和反应共价结合制备得到包覆有 儿茶酚胺类分子印迹聚合物壳层的四氧化 三铁磁性纳米微球。 2.根据权利要求1所述的一种儿茶酚胺类激素的检测方法， 其特征在于， 所述功能单体 Mc的制备方法包括： 通过β ‑溴代苯乙烷与溴素在苯环上发生亲电取代反应， 生成功能单体 Ma， 功能单体Ma在碱作用下， 消除溴化氢得到功能单体Mb， 功能单体Mb先与正丁基锂发生锂 溴交换， 再与硼酸酯反应制备 得到功能单体M c。 3.根据权利要求1所述的一种儿茶酚胺类激素的检测方法， 其特征在于， 所述模板分子 为多巴胺、 肾上腺素、 去甲肾上腺素中的一种或几种组合。 4.根据权利要求3所述的一种儿茶酚胺类激素的检测方法， 其特征在于， 所述模板分子 中多巴胺、 肾上腺素、 去甲肾上腺素的摩尔质量比为(0 ‑10)： (1‑10)： (0‑10)。 5.根据权利要求1所述的一种儿茶酚胺类激素的检测方法， 其特征在于， 所述方法可检 测生物样本中的肾上腺素、 去甲肾上腺素、 变肾上腺素、 去甲变肾上腺素、 多巴胺、 高香草 酸、 香草扁桃酸。 6.根据权利要求1所述的一种儿茶酚胺类激素的检测方法， 其特征在于， 所述步骤二， 取真空浓缩样品用磷酸二氢钾缓冲溶液定容， 加入包覆有儿茶酚胺类分子印迹聚合物壳层 的磁性纳米微球振荡吸附后， 在外加磁场作用下， 富集磁性纳米微球， 之后采用由无水乙 醇、 纯化水和醋酸组成的混合溶剂作为解吸 附溶液振荡解吸， 经氮气吹干后用初始流动相 复溶。 7.根据权利要求6所述的一种儿茶酚胺类激素的检测方法， 其特征在于， 所述步骤二， 无水乙醇、 纯化水和醋酸的体积比为(6 ‑10)： (0.5 ‑2)： (0.5‑2)。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115524427 A 2一种儿茶酚胺类激素的检测方 法 技术领域 [0001]本发明涉及儿茶酚胺类分子印迹聚合物的合成及应用技术领域， 具体为一种儿茶 酚胺类激素的检测方法。 背景技术 [0002]儿茶酚胺是一种含有儿茶酚和胺基的神经类物质， 包括去甲肾上腺素(E)、 肾上腺 素(NE)和多巴胺(DA)等多种物质， 其主要生理作用是兴奋血管的α 受体、 收缩血管、 兴奋心 脏、 加快心率、 增高收缩压。 过多的儿茶酚胺分泌可能导致高血压和心肌梗塞。 甲氧基肾上 腺素(MN)、 甲氧基去甲肾上腺素(NMN)和3 ‑甲氧基酪胺(3 ‑MT)， 分别是肾上腺素、 去甲肾上 腺素和多巴胺的代谢产物。 MN和NMN合称为MNs， 是嗜铬细胞瘤和副神经节瘤的特异性标志 物； 血液中3‑MT可能是P PGLs恶性 转移的标志 物。 [0003]嗜铬细胞瘤(PCC)和副神经节瘤(PGL)是分别起源于肾上腺髓质或肾上腺外交感 神经链的肿瘤， 主要合成和分泌大量儿茶酚胺及其代谢产物， 引起患者血压升高等一系列 临床症状。 PCC和PGL合称为PPGLs， 是继发性高血压的重要病因之一， 在 临床上对高血压患 者的病因筛查具有重要意 义。 目前临床上P PGLs常用的筛查指标 是儿茶酚胺及其代谢物。 [0004]《溶血对液相色谱串联质谱检测血浆中儿茶酚胺及其代谢产物的影响》 （检验医学 2018年12月第33卷第12期第1103页） 公开了 《嗜铬细胞瘤和副神经节瘤诊断治疗的专家共 识》 建议使用LC ‑MS/MS测定MN和NMN水平， 然而由于儿茶酚胺及其代谢物在血浆中含量较 低， 传统的LC ‑MS/MS在测量含量低的成分时， 存在灵敏度低、 甚至无法测量的缺 点。 发明内容 [0005]由于在待测定样品中儿茶酚胺类激素的浓度较低， 所以在采用LC ‑MS/MS测定时存 在灵敏度较低、 甚至无法测定的技术问题， 为了解决上述问题， 本发明提供了一种儿茶酚胺 类激素的检测方法， 该方法通过特异性结合生物样本中的肾上腺素(E)、 去甲肾上腺素 (NE)、 变肾上腺素(MN)、 去甲变肾上腺素(NMN)、 多巴胺(DA)、 高香草酸(HVA)、 香草扁桃酸 (VMA)， 并且进 行高选择及快速富集分离作用， 实现特异性 强、 灵敏度高、 检测通量高的检测 效果。 [0006]一种儿茶酚胺类激素的检测方法， 所述方法包括如下步骤： 步骤一， 对样品进行 前处理获得真空浓 缩样品； 步骤二， 首先使用包覆有儿茶酚胺类分子印迹聚合物壳层的磁性纳米微球对真空 浓缩样品进行 特异性结合、 并进行富 集和分离操作， 然后采用液相色谱串联质谱分析； 其中， 所述磁性纳 米微球的制备方法为： 利用表面分子印迹技术， 以磁性纳 米微球 为基质材料、 儿茶酚胺类激素为模板分子、 含有烯基和硼酸功能基团的功能单体Mc为功能 单体， 功能单体Mc与模板 分子的邻位羟基通过硼亲和反应共价结合制备得到包覆有儿茶酚 胺类分子印迹聚合物壳层的磁性纳米微球。 [0007]优选的， 所述功能单体Mc的制备方法包括： 通过β ‑溴代苯乙烷与溴素在苯环上发说　明　书 1/8 页 3 CN 115524427 A 3