(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211129971.7 (22)申请日 2022.09.16 (71)申请人 山东大学 地址 266237 山东省青岛市 即墨区滨 海路 72号 申请人 山东省食品药品检验研究院 (72)发明人 迟连利　王浩然　步长凯　张彬　 石峰　 (74)专利代理 机构 山东知圣律师事务所 37262 专利代理师 黄学国 (51)Int.Cl. C07K 14/52(2006.01) C07K 7/06(2006.01) C12P 21/06(2006.01) G01N 30/02(2006.01)G01N 33/53(2006.01) G01N 33/532(2006.01) (54)发明名称 一种人PF4的特 征多肽及其应用 (57)摘要 本发明属于生物医药领域， 具体涉及一种人 PF4的特征多肽及其应用， 所述多肽的序列分别 为SEQ ID NO:1、 SEQ  ID NO:2、 SEQ  ID NO:3， 所 述序列SEQ  ID NO:1： VRPRHITSL； 所述序列SEQ   ID NO:2： DLQAPL； 所述序列SEQ  ID NO:3： KKIIKKLLES。 本发明提供的人PF4的特征多肽制 备方法简便快捷， 易于获取。 在检测应用时， 将 PF4与肝素类药物混合孵育后， 使用胃蛋白酶进 行酶解反应， 脱盐富集后， 通过多反应监测技术 即可完成PF4与肝素类药物形成的复合物的检 测， 所需检测设备要求低、 分析检测速度快， 检测 成本较低， 可以作为肝素类药物免疫原性的评价 方法之一。 权利要求书2页 说明书11页 附图6页 CN 115490766 A 2022.12.20 CN 115490766 A 1.一种人PF4的特征多肽， 其特征在于， 所述特征多肽的序列分别为SEQ  ID NO： 1、 SEQ   ID NO： 2、 SEQ ID NO： 3； 所述序列SEQ  ID NO： 1： VRPRHITSL； 所述序列SEQ  ID NO： 2： DLQAPL； 所述序列SEQ  ID NO： 3： KKIIKKLLES。 2.根据权利要求1所述的特征多肽， 其特征在于， 所述SEQ  ID NO： 1肽段的质荷比m/z= 360.2； 所述SEQ  ID NO： 2肽段的质荷比m/z=656.4； 所述SEQ  ID NO： 3肽段的质荷比m/z= 400.6。 3.一种权利要求1或2所述的人PF4的特征多肽的应用， 其特征在于， 具体应用在PF4和 肝素类药物形成的复合物的分析检测中， 检测步骤 包括： a： 使用PF4和肝素类药物混合孵 育以形成复合物； b： 对步骤a所述的复合物进行酶解后， 加入同位素 标记多肽内标； c： 富集酶解产物， 并使用多反应监测技 术进行样品检测。 4.根据权利要求3所述的应用， 其特征在于， 步骤a中所述的肝素类药物选自肝素钠、 依 诺肝素钠、 达肝素钠、 那屈肝素钙、 汀肝素钠、 帕肝素钠、 舍托肝素钠、 瑞肝素钠、 贝米肝素钠 中的一种或多种。 5.根据权利要求3所述的应用， 其特征在于， 步骤b所述加入 同位素标记多肽内标为加 入13C和15N同位素标记的VRPRHITSL[13C6,15N]、 DLQAPL[13C6,15N]和/或K[13C6，15N2]KIIKKLLES 进行绝对定量。 6.根据权利要求3所述的应用， 其特征在于， 步骤c中所述的多反应监测技术中液相色 谱检测条件为： 使用Hypersil ™ BDS C18 色谱柱 （150 ×2.1 mm） 进行分离， 流速为0.2  mL/min， 洗脱梯 度如下： 0‑3 min 2%流动相 B， 3‑5 min 2%‑20%流动相B， 5 ‑10 min 20%‑35%流动相 B， 10‑13  min 35%流动相B， 13.01 ‑20 min 98%流动相B， 20.01 ‑27 min 98%‑2%流动相B； 上述百分比 为体积百分比。 7.根据权利要求3所述的应用， 其特征在于， 步骤c中所述的多反应监测技术中质谱检 测条件为： 在正离子模式下使用三重四极杆质谱进行定量分析， 设定参数如下： 正离子模式， MRM 检测模式， 离子源喷雾电压为4500  V， 传输管温度为275℃， 鞘 气气压为25  arb， 反吹气气压 为0 arb， 辅助气压为0  arb， 碰撞气气压为1.5  arb， 离子聚焦透镜电压为75， 通道 参数如下 表所示：权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115490766 A 2。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115490766 A 3