(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211143009.9 (22)申请日 2022.09.21 (71)申请人 广东产品质量 监督检验研究院 （国 家质量技术监督局广州电气安全检 验所、 广东省试验认证 研究院、 华 安 实验室） 地址 510670 广东省广州市黄埔区科 学城 大道10号 (72)发明人 李锦清　綦艳　李聪　黄翠莉　 张娟　 (74)专利代理 机构 广州海心联合专利代理事务 所(普通合伙) 44295 专利代理师 王洪娟 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01)G01N 30/06(2006.01) G01N 30/08(2006.01) G01N 30/14(2006.01) G01N 30/34(2006.01) G01N 30/72(2006.01) G01N 30/86(2006.01) (54)发明名称 一种乳粉中四溴双酚A的高分辨 率检测方法 (57)摘要 本发明公开了一种乳粉中四溴双酚A的高分 辨率检测方法， 包括以下步骤： 以乳粉为研究对 象， 样品用水溶解， 酸化乙腈提取和沉淀蛋白， 盐 析分层， 取上层清液， 用佛罗里硅土柱净化， 收集 流出液和洗脱液， 经浓缩、 复溶、 过滤等步骤后制 得待测液， 用LC/MS ‑IT‑TOF法检测， 本方法操作 简单、 回收率高、 抗基质干扰能力强、 飞行时间质 谱高分辨率定性鉴别准确可靠， 适合各种乳粉基 质中痕量四溴双酚A的准确定性鉴别和定量测 定。 权利要求书2页 说明书11页 附图5页 CN 115508469 A 2022.12.23 CN 115508469 A 1.一种乳粉中四溴双酚A的高分辨 率检测方法， 其特 征是包括以下步骤： (1)样品提取： 称取乳粉样品， 加水溶解， 再加入酸化乙腈， 混匀， 水浴加热超声萃取后， 加入盐析试剂， 涡旋， 离心， 取上层液体， 将下层样品重复萃取， 合并两次提取的上层液体， 得待净化液； (2)样品提取液净化： 将步骤(1)制得的待净化液用经过活化的佛罗里硅土柱净化， 收 集流出液和洗脱液， 经浓 缩、 复溶、 过 滤后， 制得待测液； (3)标准溶液制备： 用甲醇溶解标准品四溴双酚A配制标准品储备液， 用空白乳粉样品 的基质提取液稀释标准品储备液， 配制一组标准溶液， 用于制作与样品基质匹配的标准工 作曲线； (4)含量测定： 将步骤(3)配制的一组标准溶液用液相色谱 ‑离子阱‑飞行时间质谱法测 定， 制作与样品基质匹配的标准工作曲线， 选取步骤(2)中的待测液， 以四溴双酚A的五个加 合物母离子同位素峰的精确质量数和保留时间定性判断， 以四溴双酚A五个加 合物母离子 中响应最高的同位素峰 峰面积与标准工作曲线 进行定量， 获得乳粉中四溴双酚A含量； (5)分子式预测： 利用液相色谱 ‑离子阱‑飞行时间质谱仪自带的Formula  Predictor分 子式预测软件结合步骤(4)获得的加合物母离子同位素峰精确质量数推测分子式， 对阳性 样品作进一 步确证。 2.根据权利要求1所述的乳粉中四溴双酚A的高分辨率检测方法， 其特征是： 步骤(1)中 所述乳粉样品与水的用量关系为1g： 3～5mL～2g： 7～10mL， 所述水为去离子水， 所述酸化乙 腈中酸的体积百分含量为1～5％， 其中所述酸为甲酸或冰乙酸， 所述水与酸化乙腈的体积 比为1： 1.5～ 2。 3.根据权利要求1所述的乳粉中四溴双酚A的高分辨率检测方法， 其特征是： 步骤(1)中 所述盐析试剂为无水硫酸钠、 无水硫酸镁和氯化钠中的一种或两种， 所述盐析试剂与水和 酸化乙腈二者之和的用量关系为1g： 4.5～5mL。 4.根据权利要求1所述的乳粉中四溴双酚A的高分辨率检测方法， 其特征是： 步骤(1)中 水浴加热超声萃取时， 水浴温度为45～55℃， 超声波的频率为40～50khz， 超声萃取时间为 20～30分钟； 涡旋时采用自动涡旋混合器在2200～2500r/min转速下圆周式剧烈旋涡振荡 提取5～10mi n； 离心为在90 00～10000r/min转速下离心3～5mi n。 5.根据权利要求1所述的乳粉中四溴双酚A的高分辨率检测方法， 其特征是： 步骤(2)中 所述的佛罗里硅土柱是指商品化的佛罗里硅土柱或使用硅藻土作为填料自制装填的佛罗 里硅土柱， 柱 填料质量为0.5～1 g， 填料上方装填无水硫酸钠2.5～4g； 自制装填的佛罗里硅 土柱有两种装填方式， 方式一： 先装填硅藻土， 然后在硅藻土上方装填无水硫酸钠， 制得分 层式佛罗里硅土柱； 方式二： 将硅藻土与无水硫酸钠按质量份配比为0.5～1： 2.5～4混合， 用研钵研磨均匀后再装填， 制得混合式佛罗里硅土柱； 所述活化的佛罗里硅土柱是指用体 积比为1： 9的丙酮 ‑正己烷混合溶液10～15mL活化佛罗里硅土柱， 柱活化后， 将制得的待净 化液加入活化后的佛罗里硅土柱中， 收集流出液和洗脱液， 所述洗脱液为二氯甲烷或乙酸 乙酯， 用量 为3～5mL。 6.根据权利要求1所述的种乳粉中四溴双酚A的高分辨率检测方法， 其特征是： 步骤(2) 中所述浓缩、 复溶、 过滤包括将收集的流出液和洗脱液在水浴温度50～55℃条件下氮气吹 干或旋转蒸发至干， 然后加入1～2mL体积百分含量为60～70％的含酸甲醇水溶液复溶， 接权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115508469 A 2着在超声波频率40～50khz条件下超声2～3min， 再用孔径为0.22 μm或0.45 μm的有机系针式 滤器过滤至样品瓶中， 获得待测液， 其中所述酸为甲酸， 所述甲酸的体积百分含量为0.05～ 0.1％。 7.根据权利要求1所述的乳粉中四溴双酚A的高分辨率检测方法， 其特征是： 步骤(3)中 所述空白乳粉样品基质提取液是指不含四溴双酚A的乳粉样 品， 按照步骤(1)和步骤(2)制 得基质提取液； 用不含四溴双酚A的空白乳粉样品基质提取液稀释 配制一组浓度范围为5～ 1000ng/mL的标准溶 液， 用于制作 与样品基质匹配的标准工作曲线。 8.根据权利要求1所述的乳粉中四溴双酚A的高分辨率检测方法， 其特征是： 步骤(4)中 采用液相色谱 ‑离子阱‑飞行时间质谱法测定时， 其 液相色谱条件包括： 色谱柱： Kin etexC18， 规格100×2.1mm， 1.7 μm； 流速： 0.2 0mL/min； 柱温： 25℃； 进样量： 50 μL； 流动相A为： 体积比为 8： 2的甲醇 ‑乙腈混合溶液； 流动相B为： 体积百分含量为0.1～0.2％的甲酸水溶液； 梯度洗 脱程序为： 0.00min： A相， 45％， B相， 55％； 2.00min： A相， 45％， B相， 55％； 3.10min： A相， 90％， B相， 10％； 10.00min： A相， 9 0％， B相， 10％； 10.2 0min： A相， 45％， B相， 55％； 12.00min： A相， 45％， B相， 5 5％； 均为体积百分含量。 9.根据权利要求1所述的乳粉中四溴双酚A的高分辨率检测方法， 其特征是： 步骤(4)中 采用液相色谱 ‑离子阱‑飞行时间质谱法测定时， 在电喷雾负 离子模式(ESI ‑)下对样品待测 液和标准溶液进行定性定量测定， 采用自动扫描采集， 加热模块温度： 200～250℃； CDL温 度： 200～250℃； 雾化器流速： 1.4～1.5L/min； 干燥气压力： 100～110kPa； 离子源电压： 4.5kV； 检测器电压： 1.6～1.7kV； 校准方法： 自动调谐优化电压； 三氟乙酸钠校准质量数； MS1采集范围为m/z450～600， 重复扫描2～3次， 离子累积时间： 30～40msec； CID能量:15～ 20％， 获得四溴双酚A的五个加合物母离子MS1同位素峰的精确质量数范围为： 538.7455～ 538.7505、 540.7455～540.7505、 542.7405～542.7455、 544.7405～544.7455、 546.7405～ 546.7453； 以542.7405～542.7455的离子峰的峰面积进行定量， 其他离子峰精确质量数和 保留时间作为定性判断依据。 10.根据权利要求1所述的乳粉中四溴双酚A的高分辨率检测方法， 其特征是： 步骤(5) 分子式预测具体包括： 根据四溴双酚A分子式C15H12O2Br4， 设定化合物组成元素为C、 H、 O、 B r， 原子个数范围设为C:0～15； H:0～12； O:0～2； Br:0～4； 丢 失电荷设为H‑； 应用氮规则筛查， 筛查误差为2～20ppm； 在四溴双酚A的五个加合物同位素离子同时存在前提下， 设置电荷数 量为1， 选择质量数为538.7455～538.7505的加合物离子进行分子式预测， 当预测结果仅有 一个分子式且与四溴双酚A分子式一 致， 则验证待测样品中含有四溴双酚A。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115508469 A 3