(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211127248.5 (22)申请日 2022.09.16 (71)申请人 西安千禾药业股份有限公司 地址 710075 陕西省西安市高新区丈 八一 路1号汇鑫IBC -B座11层 (72)发明人 李晓娣　张琼　张焕娣　 (74)专利代理 机构 北京金宏来专利代理事务所 (特殊普通 合伙) 11641 专利代理师 许振强 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) (54)发明名称 一种HPLC法测定生精片含量的方法 (57)摘要 本发明涉及一种HPLC法测定生精片含量的 方法， 采用高效液相色谱法同时测定生精片中有 效成分柚皮苷、 仙茅苷的含量， 本发明在原质量 标准的基础上增加了对生精片的骨碎补中柚皮 苷、 仙茅中仙茅苷的高效液相色谱法含量测定。 该含量测定方法灵敏、 专属性强、 准确、 重现性 好， 能够弥补现有方法的不足， 有效控制药物的 质量， 使药物质量与临床治疗有效成分进行关 联， 从而达到稳定、 可控、 高效及安全的标准， 进 一步更好地满足医疗需要。 权利要求书1页 说明书11页 附图3页 CN 115420831 A 2022.12.02 CN 115420831 A 1.一种HPLC法测定生精片含量的方法， 其特征在于采用高效液相色谱法同时测定骨碎 补中柚皮苷、 仙茅中仙茅苷的含量， 具体包 含以下步骤： (1)色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂； 以有机溶剂为A相、 一定浓度的稀酸水溶液为B相， 梯度洗脱， 所述有机溶剂为选自甲醇、 乙腈或乙腈 ‑甲醇混合液， 所述稀酸水溶液选自重量 体积百分浓度0.05％ ‑1.0％的磷酸水溶液或0.05 ‑0.1mol/l醋酸铵溶液； 柱温20 ‑40℃； 紫 外检测器， 检测波长282nm； 流速为0.8ml/min ‑1.2ml/min； 理论板 数以仙茅苷计算应不低于 3000； (2)对照品溶 液的制备 分别取柚皮苷、 仙 茅苷对照品， 精密称定， 加甲醇制成每lml含0.1mg柚皮苷、 70μg仙 茅 苷的溶液， 即得； (3)供试品溶液的制备 取生精片数片， 研细， 称取0.1 ‑0.5g， 精密称定， 置索氏提取器中， 加甲醇适量， 水浴回 流提取2‑8小时， 提取 液回收甲醇并定容至25ml， 摇匀， 滤 过， 取续滤 液， 即得； 或者， 取生精片数片， 研细， 称取0.1 ‑0.5g， 精密称定， 置具塞锥形瓶中， 加甲醇10 ‑ 50ml， 称定， 超声处理30 ‑50分钟， 超声处理条件为功率300w、 频率50kHz， 放冷， 再称定重量， 用甲醇补充减失重量， 摇匀， 离心， 取 上清液， 滤 过， 取滤液， 即得； 或者， 取生精片数片， 研细， 称取0.1 ‑0.5g， 精密称定， 置具塞蒸馏瓶中， 精密加入甲醇 25‑100ml， 水浴回流提取1 ‑6小时， 提取液回收甲醇并定容至25ml， 摇匀， 滤过， 取续滤液， 即 得； (4)测定 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 ‑20μl， 注入高效液相色谱仪， 测定， 即得 测定结果。 2.根据权利 要求1所述的HPLC法测定生精片含量的方法， 其特征在于： 所述A相为乙腈， B相为体积百分浓度0.1％的磷酸水 溶液； 流速为1.0ml/mi n； 柱温为3 0℃； 检测波长282nm。 3.根据权利要求2所述的HPLC法测定生精片含量的方法， 其特征在于： 梯度洗脱， 梯度 洗脱程序为： 0～10mi n， 5％A； 10～ 20min， 5～10％A； 20～3 5min， 35％A； 35～40min， 5％A。 4.根据权利 要求1所述的HPLC法测定生精片含量的方法， 其特征在于： 步骤(3)中， 供试 品溶液的制备： 取生精片数片， 研细， 称取0.3g， 精密称定， 置索氏提取器中， 加甲醇适量， 水 浴回流提取6小时， 加水适量分数次洗涤容器和残渣， 并入提取液回收甲醇， 并定容至25 ml， 摇匀， 滤过， 取续滤 液， 即得。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115420831 A 2一种HPLC法测定生精片含量的方 法 技术领域 [0001]本发明属于药品分析检测技术领域， 具体涉及一种HPLC法测定生精片含量的方 法。 背景技术 [0002]生精片是由以下十九味药材加工而成片剂： 人参、 鹿茸、 冬虫夏草、 仙茅、 菟丝子、 枸杞子、 黄精、 沙苑子、 金樱子、 覆盆子、 补骨脂、 何首乌、 桑椹、 淫羊藿、 骨碎补、 马鞭草、 大血 藤、 银杏叶、 杜仲。 功能主治： 补肾益精， 滋阴壮阳。 用于肾阳不足所致腰膝酸软， 头晕耳鸣， 神疲乏力， 男子无精、 少精、 弱精、 精液不液化等症。 该药物在长期临床使用过程中， 证明其 具有显著的临床疗效， 深受广大患者和医务工作者的信赖。 该药是 由传统经典名方生精汤 经辨证加减而来， 增加了沙苑子、 淫羊藿、 何首乌、 桑椹、 骨碎补、 仙茅、 金樱子、 大血藤、 马鞭 草、 银杏叶、 菟丝子、 冬虫夏草、 黄精、 鹿茸、 杜仲、 人参、 补骨脂等药味， 增强其滋阴壮 阳补气 功能。 方中， 君药： 人参、 鹿茸， 举元气、 温阳督脉、 生精益髓。 臣药： 冬虫夏草、 仙茅、 菟丝子、 枸杞子、 黄精， 补命 脉火、 兴阳道、 益阴精， 暖精 流、 精满气充。 佐药： 沙苑子、 金樱子、 覆 盆子、 补骨脂、 何首乌、 桑椹、 淫羊藿、 骨碎补， 补肾壮阳、 固精缩尿、 强筋骨、 养肝明目。 使药： 马鞭 草、 大血藤、 银杏叶、 杜仲， 清热利湿、 解毒通络、 补肝肾。 生精片通过调节下丘脑 ‑垂体‑性腺 内分泌轴、 改善附属性腺的分泌功能、 调整精子自身的功能状态、 调节前列腺功能达到其药 理作用。 大量临床研究提示， 生精片能有效应对男子无精、 少精、 弱精、 精液不液化、 肾阳不 足所致腰膝酸软， 头 晕耳鸣， 神疲乏力等问题， 全面 提高男性 生活质量。 [0003]然而现有生精片的检测方法中， 仅对佐药补骨脂进行了补骨脂素、 异补骨脂素的 含量测定； 现行质量控制标准专属性差， 不能全面反映药品的质量， 难以对临床疗效性指标 进行控制和确保临床疗效的一致性， 所以， 很有必要进一步完善该产品的含量检测方法， 将 控制指标与 临床疗效进行关联， 从而更进一步保证该产品的质量和疗效。 近年来公司大力 开展提升质量研究， 为完善生精片药品的质量标准不断进行试验。 本研究以生精片柚皮苷、 仙茅苷为质量控制指标进一步提升完善质量标准研究， 采用高效液相色谱法对上述2个成 分含量进行同步测定， 建立生精片多指标成分质量控制模式， 以期为生精片质量标准控制 和提升提供参 考。 发明内容 [0004]为克服现有技术的不足， 提供了一种HPLC法测定生精片含量的方法， 对生精片成 品中臣药骨碎补中的柚 皮苷、 仙茅中的仙茅苷进行了高效液相色谱法含量测定， 该检测方 法能够弥补现有方法的不 足， 客观评价产品整体质量， 确保临床疗效的一致性。 该含量测定 方法灵敏、 专属性强、 准确、 重现性好， 能够弥补现有方法的不足， 有效控制药物的质量， 使 药物质量与临床治疗有效成分进行关联， 从而达 到稳定、 可控、 高效及安全的标准。 [0005]为实现上述发明目的， 本发明采用如下技 术方案： [0006]一种HPLC法测定生精片含量的方法， 采用液相色谱法同时测定骨碎补中柚皮苷、说　明　书 1/11 页 3 CN 115420831 A 3