SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 2497.21—2010 进出口危险化学品安全试验方法 第21部分：琼脂糖凝胶电泳试验 Test method of import and export dangerous chemicals- Part 21 :Agarose gel electrophoresis 行业标准信息服务平台 2010-03-02发布 2010-09-16实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T2497.21—2010 前言 第1部分：体内哺乳动物肝细胞程序外DNA合成（UDS）试验； 第2部分：空斑形成细胞（PFC)试验； 第3部分：大型泽繁殖试验； 第4部分：酿酒酵母有丝分裂重组试验； 第5部分：睾丸细胞UDS试验； 第6部分：哺乳类动物细胞姐妹染色单体互换体外试验； 第7部分：小鼠耳肿胀试验； 第8部分：窝淋巴结试验； 第9部分：血清溶血素测定试验； 第10部分：T淋巴细胞增殖功能测定试验； 第11部分：种系突变试验； 第12部分：单细胞凝胶电泳分析试验； 第13部分：荧光原位杂交试验； 第14部分：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳试验； 第15部分：PCR-SSCP实验； 第16部分：Western-Blot实验； 第17部分：哺乳动物行为毒理学试验； 第18部分：DNA加合物的检测方法； 第19部分：NorthernBlot实验； 第20部分：Bradford法测定蛋白质含量； 第21部分：琼脂糖凝胶电泳试验； 第22部分：DNA的Tm值测定方法； 第23部分：细胞器的分离实验方法； 第24部分：细胞免疫功能体外检测方法； 隹信息服务平 第25部分：体液免疫功能试验， 第26部分：巨噬细胞功能试验； 第27部分：流式细胞术检测调亡； 第28部分：穿梭质粒在突变检验中的应用； 第29部分：生化需氧量（BOD）测定。 本部分为SN/T2497系列标准的第21部分。 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本部分负责起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局、中华人民共和国湖南出入境检验检 疫局。 本部分主要起草人：吕刚、王利兵、李晶、张颖、赵好力宝、庞震。 本部分系首次发布的出入境检验检疫行业标准。 1 SN/T 2497.21—2010 进出口危险化学品安全试验方法 第21部分：琼脂糖凝胶电泳试验 1范围 SN/T2497的本部分规定了进出口危险化学品琼脂糖凝胶电泳的术语和定义及操作步骤。 本部分适用于进出口危险化学品琼脂糖凝胶电泳试验。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本部分。 2. 1 琼脂糖凝胶电泳 agarosegelelectrophoresis 一种简便高效的分离和纯化DNA片断的方法。由于DNA分子的双螺旋骨架两侧带有含负电荷 的磷酸根残基，因此在电场中向正极移动。在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛 效应。具有不同的相对分子质量的DNA泳动速度不一样，因而可依据DNA分子的大小来使其分离。 在电泳过程中可以通过示踪染料或相对分子质量标准参照物和样品一起进行电泳而得到检测。 试剂和材料 3 3.1电泳缓冲液：可根据实验要求和实际情况根据表1选择适当缓冲液。 表1 常用电泳缓冲液 缓冲液 贮存液（1L） Tris-乙酸(TAE)50X 242gTris 碱,57.1mL冰乙酸,100mL 0.5mol/LEDTA(pH值8.0) Tris-磷酸(TPE)10X 108gTris碱，15.5mL85%磷酸，40mL0.5mol/LEDTA(pH值8.0) Tris-硼酸(TBE)5× 54g Tris碱,27.5g硼酸,20mL0.5mol/L EDTA(pH值8.0) 碱性缓冲液1X 5mL10mol/LNaOH,2mL0.5mol/LEDTA(pH值8.0) 注：碱性缓冲液应现用现配。 3. 2 溴化乙锭溶液：工作液0.5ug/mL，避光保存。溴化乙锭是强烈诱变剂，使用时必须戴手套 3. 3 电泳级琼脂糖：根据要分离的DNA片段大小按照表2选择配制适当浓度的琼脂糖凝胶 表 2 2不同含量琼脂糖的凝胶分离范围 琼脂糖含量/% 线状DNA分子的有效分离范围(kb) 0.3 5~60 0.6 1~20 0. 7 0.8~10 0.9 0.5~7 1. 2 0.4~6 1. 5 0.2~3 2. 0 0. 1~2 3. 4 加样缓冲液。